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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠胸腺淋巴采用機械研磨法結合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為1×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠胸腺淋巴經過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

細胞簡介：

大鼠胸腺淋巴細胞分離自胸腺組織；胸腺是機體的重要淋巴器官，其功能與免疫緊密相關，是T細胞分化、發育、成熟的場所。其還可以分泌胸腺激素及激素類物質，具內分泌機能的器官。位于胸腔前縱隔。胚胎后期及初生時，是一生中重量相對大的時期。隨年齡增長，胸腺繼續發育；此后胸腺逐漸退化，淋巴細胞減少，脂肪組織增多。胸腺的結構表面有結締組織被膜，結締組織伸入胸腺實質把胸腺分成許多不分隔的小葉。小葉周邊為皮質，深部為髓質。皮質不包圍髓質，相鄰小葉髓質彼此銜接。皮質主要由淋巴細胞和上皮性網狀細胞構成，胞質中有顆粒及泡狀結構。網狀細胞間有密集的淋巴細胞。胸腺的淋巴細胞又稱為胸腺細胞，在皮質淺層細胞較大，為較原始的淋巴細胞。中層為中等大小的淋巴細胞，深層為小淋巴細胞。從淺層到深層為造血干細胞增殖分化為小淋巴細胞的過程。皮質內還有巨噬細胞，無淋巴小結。髓質中淋巴細胞少而稀疏，上皮性網狀細胞多而顯著。形態多樣，胞質中有顆粒及泡狀結構，為其分泌物，尚有散在的圓形的胸腺小體。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

公司產品：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。