iTRAQ、TMT與SILAC：三大標記蛋白定量技術對比解析檢測技術服務詳情介紹

一、技術原理概覽

1、SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）

SILAC 基于以穩定同位素標記的氨基酸（如13C6-Lys、13C6-Arg）在細胞培養過程中被細胞代謝吸收并整合進dànbáizhì結構，實現“體內”標記。通過使用含輕同位素和重同位素的氨基酸分別培養兩組細胞樣本，當細胞生長至多代后（通常為5-7代），其dànbáizhì被wánquán標記。隨后，兩個樣本在蛋白提取階段等量混合，經酶解、LC-MS/MS 分析，通過 MS1 層級的質量差異區分不同來源的肽段，計算重輕信號比值實現定量。SILAC 屬于“代謝標記”的方法，天然地避免了實驗過程中樣本處理誤差的問題。其zuì大優勢在于樣本混合發生在細胞裂解之前，極大降低了技術重復誤差。

2、iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）

iTRAQ 是一種“化學等質量標簽”技術，適用于蛋白酶解后的肽段。其原理是通過將肽段的N端及賴氨酸側鏈用iTRAQ試劑進行化學標記。iTRAQ 試劑由 reporter group（定量部分）、balance group（平衡質量）和 peptide reactive group（反應基團）組成。不同標簽在整體質量上相同，在MS1階段不可區分，但在MS2階段會釋放出不同質量的 reporter 離子，從而實現不同樣本的區分與定量。iTRAQ 目前支持 4-plex 和 8-plex，同時進行多個樣本的并行定量，廣泛應用于組織、血清等多種樣本類型的dànbáizhì組研究。

3、TMT（Tandem Mass Tags）

TMT 技術與 iTRAQ 原理類似，均屬于等質量標簽，定量信息依賴于 MS2 階段。TMT 由于其標簽結構設計的改進，現已支持更高的多重能力，包括 TMT 10-plex、11-plex、16-plex，甚至18-plex。TMT 標簽也由 reporter、balance 和 reactive 三部分構成，MS2 中通過 reporter ion 的強度實現相對定量。TMT 的優勢在于更高的通量與更強的樣本區分能力，尤其適用于大規模臨床隊列和單細胞蛋白組學研究，是當前應用zuì廣泛的定量標記技術之一。

二、主要優缺點對比

三、技術比較解讀

1、多重能力

（1）TMT 支持zuì高的 16-18 樣本并行分析

（2）iTRAQ 支持 4 或 8 plex

（3）SILAC 為 2-3 重，NeuCode 擁有擴展性

2、定量jīngquè性

（1）SILAC 依靠 MS1 的質量差定量，更少技術誤差

（2）iTRAQ/TMT 在 MS2 階段利用 reporter ion，容易受 ratio compression 影響

3、樣本適用性

（1）SILAC 只適合細胞培養模型

（2）iTRAQ/TMT 適用于細胞、組織、體液等樣本

4、成本與流程

（1）SILAC 標記時間長，重同位素明顯提高成本

（2）iTRAQ/TMT 標簽成本高，需經驗頻道調整

五、技術選型建議

SILAC是高jīngquè、重復性好的蛋白定量技術，適用于細胞模型下的動態研究； iTRAQ 適合中級通量并行分析； TMT 則是當下zuì高通量、zuì適合專題研究和專家調置的投入性技術。由于三者分別在標記方式、定量經濟和樣本適用性上存在明顯差異，科研人員應根據實驗需求、預算與樣本條件進行合理選型。

作為多年dànbáizhì組學服務商，百泰派克生物科技提供包括 SILAC、iTRAQ、TMT 在內的全流程標簽定量方案：

1、高分辨 Orbitrap 質較平臺

2、成熟標記和經典工藝流程，可實現重復 CV < 15%

3、全面應用案例，適配各類科研需求

4、用戶培養和規范化工藝輔助

歡迎了解更多，我們望為您的dànbáizhì組研究貢獻zhuānyè能力。在實際項目中，技術選型不僅取決于科學問題的本質，也受到實驗平臺能力的影響。百泰派克生物科技擁有高通量TMT/iTRAQ定量平臺與SILAC優化體系，結合一站式質譜分析服務，能夠為不同研究需求提供個性化解決方案，助力科研高效推進。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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