電融合實驗
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海達為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/7/17 10:49:25
- 訪問次數 45
產品標簽
聯系方式:張18017847121 查看聯系方式
聯系我們時請說明是化工儀器網上看到的信息,謝謝!
一、技術定義與核心原理
電融合是一種利用電場誘導細胞膜結構改變,促使兩個或多個細胞融合形成雜交細胞的技術。其核心原理基于電穿孔效應的延伸:
細胞膜極化與排列:
交流電場(AC,頻率0.5–1.5 MHz)使細胞表面電荷極化,形成偶極子,驅動細胞沿電場線緊密排列成"珠鏈狀"(雙向電泳效應)。
膜穿孔與融合觸發(fā):
短時高壓直流脈沖(DC,強度1–3 kV/cm,脈寬10–50 μs)擊穿相鄰細胞的接觸區(qū)細胞膜,形成臨時孔隙,脂質雙層在表面張力作用下重組融合。
細胞質混合與修復:
膜融合后胞質互通,細胞器重新分布,最終形成完整異核體(細胞核暫未融合)或多核融合細胞。
關鍵突破:1978年Zimmermannshou次實現植物原生質體電融合,奠定技術基礎。
二、標準化操作流程
1. 細胞預處理
細胞類型 | 處理方法 | 目標 |
---|---|---|
植物原生質體 | 纖維素酶/離析酶消化細胞壁 → 蔗糖梯度純化 | 獲得無壁裸露細胞 |
動物細胞 | 低滲緩沖液(0.3M甘lu醇)洗滌 → 調整密度至10? cells/mL | 去除血清干擾,增強電導率 |
卵母細胞/胚胎 | 透明帶酶解(如鏈霉蛋白mei)→ 去除卵丘細胞 | 暴露細胞膜便于接觸 |
2.電融合參數設置
儀器配置:ECM2001+、Multiporator等系統(tǒng)(集成AC/DC雙功能)。
核心參數:
步驟 參數范圍 作用 AC排列 頻率0.5–1.5 MHz,電壓50–150 V 細胞定向排列成鏈 DC脈沖融合 場強1–3 kV/cm,脈寬10–50 μs × 1–3次 擊穿接觸區(qū)細胞膜 緩沖液 低離子強度(0.3M甘lu醇 + 0.1–1mM Ca2?) 增強電導率,促進膜重組
3. 融合后處理
復蘇培養(yǎng):37℃培養(yǎng)液靜置30分鐘,修復細胞膜。
雜交細胞篩選:
HAT培養(yǎng)基(雜交瘤技術)或熒光染料標記追蹤融合效率。