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胞質注射實驗

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胞質注射

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   上海達為科生物科技有限公司,位于上海長江軟件園,公司目前具備較好的生物學、醫學技術服務平臺,能夠為廣大客戶提供醫學科研樣本檢測、合作研究、開發及生產服務。

公司擁有專業的實驗室、先進的實驗設備和經驗豐富的科研技術人員。技術團隊包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學、轉錄組學、蛋白質組學、代謝組學、生物化學、病理檢測、基因檢測等技術在科研中的應用與推廣。通過高度細分、較好的服務平臺,為廣大客戶提供了完善的技術解決方案和服務。目前,,涉及臨床醫學、腫瘤生物學、免疫學、細胞生物學、分子生物學等生命科學、醫學等諸多領域。

我們的目標是為了使您的工作更輕松、更快捷。為了實現一站式服務我們不斷更新實驗方法和引進新的產品,控制和降低各種成本,為您的研究加油。這既是一項長期而艱巨的工作,又是一項光榮的工作,同時也是我們企業發展的動力源泉。

 

 

 

 

制作動物模型 細胞培養 分子生物學檢測 病理學形態檢測 蛋白質技術 免疫學檢測 提供培訓服務各種檢驗儀器設備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等

一、技術定義與核心原理

胞質注射是顯微注射技術的一種,通過顯微操作系統將外源基因直接注入細胞質(而非細胞核),實現基因導入。其核心機制包括:

  1. 非整合性表達:外源DNA以游離體形式存在,通過細胞自身轉錄機制表達,不整合至宿主基因組(區別于原核注射的隨機整合)。

  2. 適用性廣:可操作單細胞(如原代細胞、干細胞)及多細胞胚胎(如2細胞期胚胎)。

  3. 瞬時表達為主:外源基因隨細胞分裂逐漸丟失,表達周期較短(通常<72小時)。

生物學基礎
依賴細胞質內的轉錄因子與RNA聚合酶完成外源基因表達,無需核定位信號(NLS)介導。


二、標準化操作流程

(一)設備與材料準備

組件參數要求功能說明引用來源
顯微操作系統微操縱器精度0.1μm,注射針內徑<0.5μm精準控制注射位置與深度
外源DNA溶液濃度1-5 ng/μL,溶于低離子強度緩沖液(如TE)減少細胞毒性,提升表達效率
靶細胞類型原代角質形成細胞、HEK-293T、早期胚胎等需具備較強DNA攝取與表達能力

(二)操作步驟

  • 關鍵參數

    • 注射壓力:5-10 hPa(過高導致細胞破裂)。

    • 注射時長:單細胞≤30秒,避免細胞脫水。

  • 存活率控制:熟練操作下細胞存活率>80%,胚胎存活率>70%。

(三)表達驗證方法

  1. 熒光標記法

    • 注射含GFP/RFP報告基因的載體,24小時后熒光顯微鏡觀察。

  2. 蛋白檢測法

    • Western Blot或免疫組化檢測目標蛋白表達。




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