從實驗到數據分析：一步步教你開展ABPP實驗檢測技術服務詳情介紹

與蛋白組學方法不同，ABPP（Activity-Based Protein Profiling）不僅能識別蛋白的表達，還能捕捉其“活性狀態(tài)”，尤其適用于如蛋白酶、磷酸酶、脫酰化酶等調控復雜的功能蛋白。那么，如何系統(tǒng)地開展一次完整的ABPP實驗？從探針選擇到質譜分析，從樣本處理到數據解讀，本文將一步步帶你拆解ABPP實驗的完整流程，為你的研究提供清晰、高效的操作指南。

一、ABPP實驗的完整流程

1、確定研究目標與酶類家族

開展ABPP實驗的dìyī步是明確研究目標：你希望分析哪類酶？在哪種生物模型或處理條件下進行？常見的目標包括：

（1）篩選腫瘤中活性異常的蛋白酶

（2）驗證候選藥物對目標酶的作用

（3）分析炎癥或凋亡信號通路中活性酶的調控模式

不同的酶類需要設計或選擇特異性的ABP（Activity-Based Probe），因此目標酶的確定決定了后續(xù)的探針策略和數據分析路徑。

2、選擇或定制活性探針（ABP）

ABP 是 ABPP 成功的關鍵工具，結構上一般由以下三部分組成：

3、探針標記ABPP實驗樣本

標記實驗的執(zhí)行步驟主要分為兩種模式：

（1）細胞裂解液標記（in vitro）

* 提取細胞/組織蛋白，保持酶活性

• 與探針混合孵育（30–60 min）

• 終止反應并進行下游處理

適用于酶篩選或藥物作用機制研究。

（2）活細胞或組織標記（in situ/in vivo）

* 直接在活細胞中添加探針

• 反應完成后快速裂解

• 捕獲在原位狀態(tài)下的酶活性圖譜

更接近生理狀態(tài)，但需注意探針通透性和毒性。

4、富集與酶解

標記完成后，下一步是將被標記的“活性酶”從復雜背景中富集出來：

（1）若使用shēngwùsù標記 → 使用鏈霉親和磁珠進行親和純化

（2）若使用點擊基團 → 進行點擊反應后連接到富集載體（如Biotin-Azide）

富集完成后，用yídànbáiméi（Trypsin）等進行標準蛋白酶解反應，為后續(xù)質譜檢測準備肽段。

5、質譜檢測（LC-MS/MS）

樣本準備好后，進入高分辨率質譜分析階段。建議使用如下策略：

（1）儀器平臺：如Orbitrap Exploris 480，適合高通量、高精度需求

（2）分離方式：納升級反相色譜（nanoLC）可提升肽段分離能力

（3）檢測模式：可選擇DDA（數據依賴采集）或DIA（數據獨立采集）

（4）定量方法：支持Label-Free、TMT、iTRAQ等多種定量策略

此階段獲取的ABPP實驗原始數據為后續(xù)構建活性圖譜提供核心信息。

6、數據分析與活性譜圖繪制

ABPP的zuì終目標是生成一份活性蛋白圖譜。數據分析流程主要包括：

（1）肽段鑒定與定量

利用zhuānyè軟件（如MaxQuant、Proteome Discoverer）進行肽段識別、定量。

（2）特異性篩選

只保留已成功標記（被探針捕獲）的蛋白，去除背景信號。

（3）活性變化分析

比較不同處理組（如藥物處理 vs 對照）的酶類活性水平差異，常用log2 fold change + FDR篩選。

（4）功能注釋與通路富集

結合GO、KEGG、Reactome數據庫，對高活性或差異酶類進行功能分類與通路分析，提煉生物學意義。

（5）圖譜展示

輸出蛋白酶活性熱圖、分子互作網絡、通路富集圖等，輔助撰寫論文或申請zhuānlì。

二、常見問題解答（FAQ）

Q1：ABPP實驗可用于哪類蛋白？ 主要用于具有活性位點、可被探針共價修飾的酶類蛋白，如蛋白酶、磷酸酶、泛素化酶等。

Q2：探針非特異性如何解決？ 可通過空白組+競爭抑制組進行背景去除，并優(yōu)化探針濃度與反應時間。

Q3：數據重復性如何保證？ 推薦進行≥3次生物學重復，同時采用TMT等方法減少批次效應。

三、百泰派克生物科技：ABPP全流程一站式服務平臺

為降低ABPP實驗的技術門檻、提升實驗成功率，百泰派克生物科技提供以下服務：

1、多種活性探針篩選與合成（支持定制化設計）

2、全流程實驗操作（從樣本處理到富集酶解）

3、高分辨質譜檢測與分析

4、差異蛋白活性分析、通路注釋與圖譜輸出

借助*的Orbitrap平臺和功能蛋白組學分析體系，百泰派克助力您高效完成從活性識別到靶點挖掘的科學探索。

ABPP的價值在于，它不僅揭示蛋白的“在”與“不在”，更回答“活著的，正在起作用的，是誰”。掌握ABPP，不僅是掌握一種技術，更是打開了理解dànbáizhì功能狀態(tài)和jīngzhǔn靶點發(fā)現(xiàn)的大門。歡迎聯(lián)系百泰派克生物科技，獲取ABPP實驗流程的zhuānyè培訓與項目支持，助您從表達組跨越到功能組！

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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