疏水預裝柱 萃取

疏水層析（HIC）的分離是基于蛋白質的疏水性氨基酸與基質的疏水性配基之間的可逆性相互作用。

蛋白質和多肽的疏水氨基酸大多埋藏在蛋白質分子結構的內部。然而，仍然有一些疏水性氨基酸會暴露在蛋白分子的表面與基質的疏水性配基進行相互作用。與反相層析相比，疏水作用層析基質上的配體濃度要低很多，洗脫條件也更加溫和，從而有助于保持生物分子的生物活性。HIC特別適合于純化經過硫酸銨沉淀或高鹽洗脫后的樣品，高離子強度可以加強蛋白與填料配基之間的疏水相互作用。

高離子強度的緩沖液可以增強疏水相互作用，這使得HIC成為硫酸銨沉淀和離子交換層析的一個純化步驟。HIC非常適合于純化工藝中的捕獲或中純步驟。

HIC期間，樣品成分在高離子強度的緩沖液（典型的是1~2M的硫酸銨或者是3M的NaCl）中結合到填充柱上。高濃度的鹽，尤其是硫酸銨，可能會沉淀蛋白質。因此，需要檢測將要使用的結合條件下靶蛋白的溶解性。通常采用降低的鹽梯度對靶蛋白進行連續梯度或分布梯度洗脫。

疏水預裝柱 萃取

根據蛋白質結構，處于水溶液中的蛋白質會不同程度的暴露在分子表面。這些暴露的殘基既有親水性的氨基酸（比如帶電荷的氨基酸），或者疏水性氨基酸（如苯丙酰胺、酪氨酸、色氨酸）。一般而言，疏水基團更喜歡埋藏在蛋白質三維結構的內部，但是有些基團會暴露。高濃度的鹽可以使蛋白質-蛋白質之間進行結合而從溶液中析出或形成結晶。從Hofmeister開始，科學家們已經認識到不同類型的鹽在蛋白質分子間的相互結合或疏水表面之間的相互作用過程中起到了重要的作用。

這些現象形成疏水作用層析（HIC）的基礎。根據蛋白質結構和一系列可控因素包括鹽濃度、pH、溫度和有機溶劑，含有疏水基團的層析基質以不同程度結合水溶液中的蛋白質，如下圖所示。

HIC適合純化過程的所有步驟。應用實例包括高產量捕獲、單克隆抗體精細純化、分離全長形式的蛋白和截短體、活性物質和無活性物質的分離以及病毒清除。