描述

雙標簽免疫沉淀/免疫共沉淀試劑盒，包含足夠完成 20 個反應的試劑，每個TAP反應，TST樹脂需要 100μL，flag樹脂需要 50 μL。

貯存條件

收到本產品后flag樹脂和洗脫液于 -20 ℃ 貯存，其他產品于 4 ℃ 貯存。

產品簡介

輝駿生物雙標簽免疫沉淀  /免疫共沉淀試劑盒能夠高效完成單標簽融合蛋白或雙標簽融合蛋白

免疫共沉淀實驗。以雙標簽融合蛋白做TAP為例，將Flag標簽、TST標簽與誘餌蛋白在目的細胞中融合表達，*步用TST樹脂來粗調取誘餌蛋白的互作蛋白，然后將這一步的洗脫液加入到第二步Flag樹脂中來更進一步調取誘餌蛋白的互作蛋白。本試劑盒不僅可以調取Flag或TST單標簽融合蛋白及其互作蛋白，又可以調取Flag和TST雙標簽融合蛋白及其互作蛋白，另外相對于傳統的Flag-HA  IP試劑盒，本試劑盒具有產物中不含抗體且蛋白沒有變性的優點，其產物做Western Blot檢測時不會受IgG影響，后本試劑盒中親和材料與誘餌蛋白結合多且強，調取的互作蛋白更多。

FLAG-tag 是一段由8個氨基酸殘基組成，N-DYKDDDDK-C (1012 Da)，其作用是標記蛋白。在蛋白表達和定位研究中，可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列連接起來，可以連接在目的蛋白的C端或N端，然后將整合后的基因轉入細胞中或胚胎干細胞亦或受精卵中。TST標簽是strep-tagⅡ（Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys）的升級版，由兩個strep-tagⅡ外加連接臂組成，與融合蛋白結合能力更強，結合位點更多，其作用是標記蛋白。在蛋白表達和定位研究中，可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和TST-tag基因序列連接起來，可以連接在目的蛋白的C端或N端，然后將整合后的基因轉入細胞中或胚胎干細胞亦或受精卵中。

流程簡述（TAP）

1. 將細胞裂解液與TST樹脂，室溫下孵育 1-2 小時，或 4 ℃過夜。

2. 在室溫下，經過漂洗，洗脫得到洗脫液1。

3. 在洗脫液1中加入到Flag樹脂中，室溫孵育 2-3 小時，或 4 ℃過夜。

4. 室溫下，漂洗，加洗脫緩沖液B得到洗脫復合物。

所需額外儀器

• 磷酸鹽緩沖液（PBS，100 mM 磷酸鈉，100 mM 氯化鈉；pH 7.2）

• Flag抗體

• TST抗體