據輝駿生物在科研實驗中調查發現，大家在前期調研中是否經常遇到這些問題：

1、通過各種在線軟件進行預測獲得 miRNA 靶向基因，但對 miRNA 靶基因的實際作用不清楚。

2、預測到轉錄因子對基因的表達起抑制或增強的作用，而具體活性以及結合位點仍然需驗證。

3、未知 lncRNA 或者 circRNA 吸附 miRNA 效果。

這時候需用到螢光素酶（Luciferase）實驗了。

輝駿生物介紹下熒光素酶的2個應用：

1：pGL3-Basic——用于轉錄因子結合位點與啟動子活性分析。

當我們把待分析的啟動子區段構建到 F-Luciferase 上游，和轉錄因子共轉染分析 F-Luciferase 活性即可反應啟動子的活性高低。該質粒通常需要結合持續性表達 R-Luciferase 的載體作為內參以校正不同樣品之間轉染的轉染效率。

啟動子的作用相當于「基因開關」，能夠控制基因表達的起始。而啟動子的活性受轉錄因子的調節，轉錄因子是一種具有調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。一些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的 DNA 結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。螢光素酶報告基因分析（luciferase assay）是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段。

將靶啟動子的特定片段插入到報告基因質粒中螢光素酶編碼序列的 5』端，再與轉錄因子表達質粒共轉染細胞，加入特定的螢光素酶底物，通過檢測熒光的強度可以測定螢光素酶的活性，從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。結合定點突變等方法則可進一步確定轉錄因子與靶標啟動子的作用。

2、psiCHECK2——用于 miRNA 與其靶點相關分析

包括 miRNA 靶基因驗證、lncRNA 與 circRNA 吸附 miRNA 驗證等。需要把 miRNA 潛在結合靶點克隆到 R-Luciferase (hRLuc) 3』UTR 區域，然后與待測 miRNA 共同轉染細胞內測定 R-Luciferase 活性高低，F-Luciferase（hLuc+）作為校正內參和不同樣品之間轉染的轉染效率。

miRNA 通常功能性作用于靶基因 3'UTR，因此可以將目的基因 mRNA3'UTR 序列插入載體 R-Luciferase (hRLuc) 3'UTR 區域， 通過比較 miRNA 引起的 R-Luciferase 活性高低來定量檢測 miRNA 對目的基因的抑制作用；結合定點突變等方法則可進一步確定 miRNA 對靶基因 3'UTR 的直接靶向序列。

想要成功完成microRNA靶基因驗證？找輝駿生物：

1、靈敏度高，無內源性干擾；

2、檢測范圍寬，大于7個數量級；

3、檢測速度快，樣本無須孵育等預處理；

4、操作簡便，可以在同一管內完成2個熒光素酶檢測。

客戶提供-輝駿生物

1、miRNA表達載體或miRNA mimics

2、預測靶基因非翻譯區的載體和序列

交付產物

1、構件號載體質粒和甘油菌

2、熒光素酶檢測原始數據

3、數據分析結果實驗

mirRNA靶基因實驗周期及費用-輝駿生物

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