產品信息

DeltaVision Elite高分辨活細胞成像系統 高分辨率活細胞成像系統是用于活細胞長時間、高清晰度、高靈敏度成像的設備。

●更高的靈敏度 

●更少的光損傷和光淬滅

●更快的速度——高可達300fps的成像速度

●高度均一的光學系統 

●InsightSSI ™ 固態照明光源

●3D 還原型反卷積 

●NanoMotion ™ 全自動3D 載物臺

DeltaVision |DV Elite活細胞成像工作站

2014-09-30 15:12 宋鵬

DeltaVision Elite高分辨活細胞成像系統活細胞工作站原理

快速去卷積(deconvolution)技術

    當一個點光源經過顯微鏡的光路，由于鏡片對光線的衍射和散射，終呈現在觀察者面前的是一個模糊的點，所以點光源變成模糊的點的過程即為卷積。去卷積就是把模糊的點還原成點光源的過程。

    三維寬場去卷積成像技術是應用光學切片方法獲取三維標本的二維圖像序列,然后通過去卷積圖像處理方法進行圖像恢復,進而進行三維重建的一種以光學技術和圖像處理技術為核心的顯微成像方法。如下圖：

    與共聚焦顯微鏡所采用的方法不同,寬場去卷積技術不使用共焦針孔,因此能將所有物鏡搜集到的熒光信號全部送到高靈敏度的相機中形成圖像。

    通過將非焦平面的光線還原至焦平面上，大大提高了樣品信號強度以及圖像的信噪比。

活細胞工作站適用范圍

1、活細胞樣品觀察

活細胞工作站通過細胞培養裝置提供適宜細胞生長的溫度、氣體環境來保證活細胞樣品的長時間存活，可用于觀察：

1）細胞分裂與細胞周期

2）細胞遷移與細胞運動

3）細胞信號傳導

4）鈣離子信號研究

5）宿主與病原體相互作用

6）其它活細胞樣品觀察

2、固定樣品觀察

    活細胞工作站采用的去卷積技術能夠很好的保證微弱信號（易淬滅）、細微結構樣品的圖像質量，同時采用的固態冷光源對于細胞的損傷較小，因此活細胞工作站不僅能夠觀察普通固定熒光樣品，同時對于微弱信號（易淬滅）、細微結構的固定樣品也有很好的觀察效果。

活細胞工作站操作流程

開始使用顯微鏡工作之前，請先確認：

ü 控制器、電源、相機處于關閉狀態（根據指示燈或風扇判斷）；

ü 載物臺上不應有任何載玻片或培養皿；

ü 物鏡應降到低位置，表面鏡油已清除，查看當前所使用物鏡的放大倍數；

開機及初始化步驟

1. 按一下電腦開關以及控制器開關，電腦開關指示燈為藍色，控制器指示燈為黃色；

2. 等待電腦啟動，以用戶名worx登錄，密碼為cn71709；等待小控制面板上的指示燈變為紅色；

3. 打開電腦桌面上的“startsoftWoRx”，點擊File | Acquire (Resolve3D)，確認物鏡已降到低位置，在彈出窗口上點擊Initialize開始初始化；

4. 初始化完成后，出現Resolve3D、Data Collection、Filter Monitor三個窗口，系統啟動完成。

（注：如果需要進行長時間的活細胞觀察，請在實驗開始前至少1個小時打開溫度控制器加熱開關，對顯微鏡和樣品進行預熱，使其達到觀測狀態）

觀察及拍攝步驟

1. 目鏡下找到觀察目標；

2. 選擇好需要拍攝視野（可同時選擇多點）；

3. 選擇好熒光通道及熒光強度曝光時間等；

4. 選擇Z軸拍攝層數、拍攝總時長、拍攝時間間隔、確認熒光通道；

5. 設置文件保存位置及文件名；

6. 開始拍攝。

（注：如長時間活細胞觀察，建議實驗開始前1小時觀察氣體供應量及溫度，確定實驗穩定開始后離開）

關機順序

1. 取下樣品，清除物鏡上的鏡油，把物鏡降到低位置。

2. 退出Resolve3D程序，關閉工作站PC和顯示器（如果當日不再使用）；

3. 按一下控制器開關關閉控制器，等待小控制面板燈由紅變綠，后燈滅；

4. 確認電腦和控制器都關閉后，關閉總開關。

活細胞工作站注意事項

樣品制備注意事項

1. 活細胞實驗提前購買培養皿；

2. 固定樣品盡量使用0.17mm厚度蓋玻片；

3. 根據實驗設計選擇細胞密度（如需觀察細胞分裂，細胞不能太密，如需觀察細胞遷移，細胞不能太稀）；

4. 懸浮細胞*提前處理，例如使用poly-lysine或相似物質的玻璃底的培養皿；

5. 活細胞觀察前使細胞處于生理狀態；

6. 了解細胞對于溫度、氣體、PH值等的需要；

7. 熒光素的選擇，活細胞工作站有三套濾光片，如選擇多通道觀察熒光時，不同濾光片不能同時觀察，濾光片具體情況如下圖：

Standard：DAPI, FITC, TRITC, CY5

Live cell：CFP, GFP, YFP, mCherry

Alexa：DAPI, FITC, A594, CY5

物鏡相關注意事項

1. 在實驗過程中如需切換物鏡，務必先把物鏡降到低位置，防止鏡頭與載物臺發生碰撞；

2. 請注意區分油鏡（100X、60X）和空氣鏡（40x、20X、10X）。如需從油鏡切換到空氣鏡，請先將蓋玻片上的鏡油擦凈，防止污染空氣鏡鏡頭；

3. 確認Resolve3D | Lens選項中已選擇的物鏡與當前所使用的物鏡相同；

4. 選擇合適的鏡油，在物鏡和蓋玻片上各滴一小滴。切勿使玻璃棒接觸到鏡頭表面，以防滑傷鏡頭；玻璃棒也不要接觸蓋玻片，防止沾上灰塵或熒光染料進而污染鏡油；

5. 務必嚴格控制鏡油的滴入量。過多的鏡油會流入鏡頭，造成物鏡內部光學元件污染；

6. 滴好鏡油后須及時蓋上瓶蓋并擰緊，放回原位，防止鏡油被污染；

7. 當您的實驗完成后，請及時清除鏡頭上的鏡油。先使用擦鏡紙輕輕擦去鏡頭表面鏡油，再用棉簽蘸取擦鏡液輕輕擦掉鏡頭玻璃表面的鏡油，切勿用力來回擦拭，以防滑傷鏡頭。棉簽或鏡頭紙不能重復使用，必須注意保存，防止落入灰塵；

8. 工程師會定期對物鏡進行全面的清潔維護。所以，您只需要把鏡頭表面的鏡油清除，不影響下次使用即可，切勿過度擦拭；

9. 如果鏡油難以清除，或有鏡油流到物鏡臺或載物臺上，請立即通知工程師。

一般性事項

1. 每次使用顯微鏡前后請在《儀器使用日志》上登記；

2. 請注意保持顯微鏡室的潔凈，注意防塵；

3. 顯微鏡屬貴重儀器，請嚴格按照操作規程合理使用，愛護顯微鏡。

常見故障排查

問題1、視野下一邊亮一邊暗：檢查物鏡、EP轉輪是否轉到位；

問題2、熒光燈亮，但鏡下黑暗：排除樣品本身問題后，查看二分鏡是否旋到對應數字（見附表）；

問題3、小控制面板操作失靈：重啟控制面板，長按控制面板電源（機柜中黃色圓圈）關閉，等待30秒后開啟控制器電源，等紅燈亮起后重新打開軟件進行初始化（注意鏡頭降到低位）；

問題4、鏡下觀察中間亮四周暗：打開軟件Resolve3D窗口下的“setting”，點擊“illumination”標簽，左右拖動“Field Stop Aperture”右側拖條，聽到顯微鏡會隨著拖動發出聲響，后調到右側，顯示數字100即可。