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國產(chǎn)凝膠凈化系統(tǒng)的核心依托于凝膠過濾色譜技術(shù)
國產(chǎn)凝膠凈化系統(tǒng)的核心依托于凝膠過濾色譜技術(shù)。凝膠作為一種具有特殊三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的介質(zhì)，其內(nèi)部存在著大量不同孔徑的孔隙。當(dāng)樣品混合物隨著洗脫液流入裝有凝膠的色譜柱時，一場基于分子大小差異的“分離大戲”就此展開。
較大分子量的物質(zhì)由于體積龐大，無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的微小孔隙，只能沿著凝膠顆粒之間的空隙，以較快的速度向下遷移，先被洗脫出色譜柱。而較小分子量的物質(zhì)則能夠順利地進(jìn)入凝膠內(nèi)部的孔隙之中，在孔隙內(nèi)不斷擴(kuò)散、徘徊，行進(jìn)路徑變得曲折且漫長，因而被洗脫出來的時間相對較晚。通過這種巧妙的方式，不同分子量大小的物質(zhì)得以在色譜柱中實(shí)現(xiàn)分離，進(jìn)而達(dá)到凈化、提純樣品的目的。例如在蛋白質(zhì)純化過程中，目標(biāo)蛋白質(zhì)若處于特定分子量范圍，就能利用凝膠凈化系統(tǒng)準(zhǔn)確地將其從復(fù)雜的混合體系中分離出來，去除那些分子量過大或過小的雜質(zhì)蛋白、多糖等成分。
國產(chǎn)凝膠凈化系統(tǒng)的使用注意事項：
1.環(huán)境要求：安裝本儀器的實(shí)驗(yàn)臺應(yīng)水平、穩(wěn)固，并具有足夠的放置空間。避免在具有腐蝕性氣體、大量灰塵或能產(chǎn)生強(qiáng)磁場的地方安裝本儀器，否則將會影響儀器的正常運(yùn)轉(zhuǎn)及縮短儀器的使用壽命。實(shí)驗(yàn)室的室溫應(yīng)控制在15℃ -30℃范圍內(nèi)，并且波動要小；濕度在45 -80范圍內(nèi)。由空調(diào)或其他設(shè)備產(chǎn)生的氣流不要直吹儀器，避免光線直射及振動。
2.流動相管理：流動相的純度要求高，建議使用色譜純及以上級別的流動相，并使用0.45μm的濾膜過濾，超聲脫氣混合均勻，以去除雜質(zhì)和氣泡，保證系統(tǒng)正常運(yùn)行。同時，要根據(jù)凝膠凈化色譜柱的規(guī)格要求配置相應(yīng)的流動相，嚴(yán)格按照規(guī)定的比例進(jìn)行配置，避免使用不合適的流動相對色譜柱造成損害。流動相每次配制要適量，如果放置時間過長，需重新配制。
3.樣品處理：樣品濃度要適中，過高可能導(dǎo)致柱超載，使分離效果變差；過低則可能降低檢測靈敏度，增加檢測誤差。樣品在進(jìn)樣前必須經(jīng)過適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，如過濾、脫水等，以防止雜質(zhì)堵塞色譜柱或影響分離效果。
4.儀器維護(hù)：每次使用后要用適當(dāng)?shù)那鍧嵰呵逑磧x器，并用干凈無菌的紙巾擦干，不可使用有機(jī)溶劑或強(qiáng)酸堿等腐蝕性物質(zhì)清洗。同時，也應(yīng)定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和測試，確保儀器正常使用。出現(xiàn)故障時，應(yīng)由專業(yè)人員進(jìn)行檢修或更換備品備件。
5.操作規(guī)范：在連接系統(tǒng)的PEEK接頭時，適當(dāng)擰緊即可，過度用力會造成螺紋損壞。嚴(yán)禁使用酸、堿性流動相，嚴(yán)禁使用水作為流動相，嚴(yán)禁使用緩沖鹽。
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