Hep-3B [Hep3B]人肝癌細(xì)胞系
Hep-3B [Hep3B]人肝癌細(xì)胞系源于人體肝細(xì)胞癌組織,是研究肝癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制、開(kāi)發(fā)抗癌藥物的重要模型。在顯微鏡下,Hep-3B 細(xì)胞呈現(xiàn)典型的上皮樣癌細(xì)胞形態(tài),多為多邊形或不規(guī)則形,以貼壁方式生長(zhǎng)于培養(yǎng)瓶底部,細(xì)胞間連接緊密,常堆疊形成多層細(xì)胞集落。細(xì)胞胞質(zhì)豐富,經(jīng)染色后呈嗜酸性,內(nèi)部線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器異常發(fā)達(dá),線粒體為癌細(xì)胞快速增殖提供充足能量,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)則大量參與異常蛋白的合成與加工;細(xì)胞核大且深染,核質(zhì)比例失調(diào),核仁明顯且數(shù)目增多,部分細(xì)胞還可見(jiàn)多核及異常核分裂象,這些形態(tài)學(xué)特征直觀體現(xiàn)出其惡性腫瘤細(xì)胞的本質(zhì)。
Hep-3B 細(xì)胞具有顯著的生物學(xué)特性。在增殖能力上,其細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制紊亂,Cyclin D1、CDK4 等蛋白高表達(dá),促使細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶持續(xù)活化,推動(dòng)細(xì)胞快速?gòu)?G1 期進(jìn)入 S 期,在適宜培養(yǎng)條件下,細(xì)胞倍增時(shí)間約為 24 - 36 小時(shí)。同時(shí),Hep-3B 細(xì)胞中 Wnt/β-catenin、PI3K/AKT 等信號(hào)通路異常激活,Wnt/β-catenin 通路激活后,β-catenin 蛋白在細(xì)胞質(zhì)中大量積累并轉(zhuǎn)入細(xì)胞核,啟動(dòng)一系列與細(xì)胞增殖、侵襲相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄;PI3K/AKT 通路則抑制細(xì)胞凋亡,增強(qiáng)細(xì)胞代謝活性,進(jìn)一步促進(jìn)癌細(xì)胞的存活與增殖。在侵襲轉(zhuǎn)移方面,Hep-3B 細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP-2 和 MMP-9 的能力較強(qiáng),這些蛋白酶能夠高效降解肝組織細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白、層粘連蛋白等成分,破壞基底膜完整性;細(xì)胞表面整合素家族蛋白表達(dá)上調(diào),增強(qiáng)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附與脫離能力,為癌細(xì)胞突破上皮屏障、發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。此外,Hep-3B 細(xì)胞對(duì)部分hua療藥物存在天然耐藥性,這種特性使其成為研究肝癌耐藥機(jī)制的理想對(duì)象。
培養(yǎng) Hep-3B 人肝癌細(xì)胞系需遵循嚴(yán)格的操作規(guī)范。常用含 10% 優(yōu)質(zhì)胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)體系,胎牛血清中的生長(zhǎng)因子、氨基酸等物質(zhì)能充分滿足細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝需求;添加 1% 的青mei素 - 鏈mei素雙抗溶液,防止細(xì)菌污染。將細(xì)胞置于 37℃、5% 二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中,模擬人體生理環(huán)境,維持細(xì)胞內(nèi)酸堿平衡與酶活性。當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 80% - 90% 時(shí),使用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液進(jìn)行消化傳代,消化過(guò)程需在顯微鏡下實(shí)時(shí)觀察,避免過(guò)度消化損傷細(xì)胞,傳代比例一般控制在 1:3 - 1:5。凍存時(shí),采用 90% 胎牛血清與 10% 二甲基亞砜混合凍存液,遵循程序降溫原則,先于 - 80℃冰箱過(guò)夜,再轉(zhuǎn)移至液氮中長(zhǎng)期保存。在培養(yǎng)過(guò)程中,還需定期檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)、基因型穩(wěn)定性及耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)情況,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
在科研應(yīng)用領(lǐng)域,Hep-3B 細(xì)胞系成果豐碩。在肝癌發(fā)病機(jī)制研究中,科研人員借助該細(xì)胞系深入探究 TP53、CTNNB1 等基因突變與肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián),發(fā)現(xiàn) TP53 基因缺失與 Wnt/β-catenin 通路激活協(xié)同作用,顯著加速癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程。在藥物研發(fā)方面,Hep-3B 細(xì)胞是篩選抗肝癌藥物的重要模型,新型的靶向 VEGFR 的小分子抑制劑、免疫檢查點(diǎn)抑制劑在該細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)中,能有效抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;針對(duì)其耐藥特性開(kāi)展的聯(lián)合用藥研究,也取得了顯著進(jìn)展,為克服肝癌耐藥問(wèn)題提供了新策略。此外,Hep-3B 細(xì)胞還用于評(píng)估肝癌的新型治療方案,如納米顆粒載藥系統(tǒng)、基因治療策略等,助力優(yōu)化肝癌治療手段,推動(dòng)肝癌診療技術(shù)不斷進(jìn)步。
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