大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa北京方程生物公司現貨供應

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa水平。用純化的大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa ，再與 HRP標記的大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa呈正相關。 用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度 （OD值） ，通過標準曲線計算樣品中人大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測elisa濃度。

 

1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象，可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應為室溫）。當日使用。3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為500pg/mL）。然后根據需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品：取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。 4. 生物素化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。當日使用。

 

Elisa實驗可能會出現的問題及解決辦法：1. 加入反應終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。a.原因：未加入酶標記物。解決辦法：請按照操作步驟進行。b.原因：試劑盒內容物未能充分回。解決辦法：確定試劑盒內容物回溫后再進行操作。c.原因：室溫太低。解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當延長溫育時間。d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。解決辦法： 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。e.原因：試劑盒已過有效期限。解決辦法：請更換成仍在有效期限內的試劑盒。2. 標準曲線線性不佳，或是平行性不好。a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)。b.原因：操作時間拖太久。解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。c.原因：微孔間相互污染。解決辦法： 加樣品時，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。d.原因：標準品或酶標記物所加入的量不*。解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。f.原因：洗板過程發生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。解決辦法：請隨時監控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。a.原因：室溫太高(>25℃)。解決辦法： 若無法降低室內溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。b.原因：底物溶液受到污染。解決辦法： 若發現底物溶液已呈現淡藍色，請不要再使用。c.原因：反應時間超過太久。解決辦法：請控制反應時間。d.原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。b.原因：洗板過程發生問題(同2-f.)。解決辦法：請參考2-f.c.原因：添加樣品或酶標記物的量不*。解決辦法： 請參考2-d.

 

 樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋胞懸液，細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備
用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

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