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無細胞蛋白表達后零處理進行BLI(Biolayer Interferometry)
近日，珀羅汀生物收到某藥企研發團隊的反饋：使用兩款PLD無細胞蛋白表達試劑（PLDK001、PLDK002），成功實現3個蛋白的高效表達，并通過BLI檢測無細胞反應后上清快速完成了功能性驗證！
生物層干涉術（Biolayer Interferometry, BLI）是一種非標記的、實時監測的先進技術，主要用于生物分子間或是生物分子與小分子間相互作用分析。在蛋白與配體的相互作用檢測時，基于傳統細胞表達的蛋白樣品通常需要經過復雜的細胞破碎、純化等前處理。然而在本案例中，通過無細胞表達技術獲得的重組蛋白，實現了上清液零處理直接BLI檢測！
圖1 ：基于傳統細胞表達系統的BLI檢測與本案例基于無細胞表達（CFPS）的BLI檢測流程對比示意圖
本案例實驗結果可謂亮點紛呈
1.高可溶表達：SDS-PAGE清晰顯示，3個蛋白在無細胞表達上清液中均呈現強目的條帶（圖1），傳統大腸桿菌系統中易形成的包涵體難題被破解！
圖2： 三個蛋白在PLDK001、PLDK002試劑盒中表達的SDS-PAGE膠圖
2.低背景：蛋白3經BLI（生物膜層干涉技術）檢測顯示：帶His標簽的目的蛋白與背景信號區分度高（圖3），表明表達產物背景干擾小，無需復雜純化即可直接用于下游結合實驗。
圖3：BLI通過抗His捕獲傳感器可從表達上清中捕獲蛋白3
3.強親和活性：最令人振奮的是——蛋白2與其配體蛋白的BLI實時結合曲線顯示典型高效結合特征，表明該蛋白具有強親和活性！這種無細胞快速表達+BLI快速檢測親和活性的方案，將為藥物靶點蛋白篩選貢獻新速度。
圖4：蛋白2與其配體蛋白有強親和活性
無細胞蛋白表達技術：推動靶點蛋白開發的“高能引擎”
從基因到蛋白，再到活性驗證， 珀羅汀無細胞蛋白表達技術猶如“高能引擎”，推動靶點蛋白極速表達，為藥物發現提供“無細胞速度”。對于分秒必爭的新藥研發，速度即是壁壘，活性就是王-道！此次客戶的成功實踐，驗證了珀羅汀無細胞表達平臺的三重價值：
√ 打破表達壁壘——高難度蛋白輕松可溶表達；
√ 跳過純化瓶頸——表達上清直通活性檢測；
√ 壓縮研發周期——將傳統數周流程縮短至數天！
對比傳統細胞表達系統，珀羅汀無細胞技術在此次案例中展現出壓倒性優勢：
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