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人核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒實驗使用說明書

  • 資料類型

    doc
  • 文件大小

    13KB
  • 瀏覽次數

    259次
  • 上傳時間

    2024年10月25日
關鍵詞
核因子κB受體活化因子配基,RANKL,Elisa試劑盒,人試劑盒,試劑盒
上傳者
本生(天津)健康科技有限公司
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資料簡介

  人核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒實驗使用說明書 本生一直視質量控制為企業的生命,追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標,本生,您信任的合作伙伴!本生試劑盒

  檢測原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被核因子κB受體活化因子配基(RANKL)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子κB受體活化因子配基(RANKL)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

  樣品收集、處理及保存方法

  1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

  2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

  3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

  5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  自備物品

  酶標儀(450nm)

  高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  37℃恒溫箱

  操作注意事項

  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶溶解后再使用。

  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。

  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

  所有液體組分使用前充分搖勻。

  試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注

  微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無

  標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無

  樣本稀釋液6mL3mL無

  檢測抗體-HRP10mL5mL無

  20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

  底物A6mL3mL無

  底物B6mL3mL無

  終止液6mL3mL無

  封板膜2張2張無

  說明書1份1份無

  自封袋1個1個無

  注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、50、100、200、400、800 pg/mL

  試劑的準備

  20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

  洗板方法

  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

  操作步驟

  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

  結果判斷

  繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

  


  試劑盒性能

  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

  靈敏度:檢測濃度小于1.0 pg/mL。

  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

  有效期:6個月



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