手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
一、原理
回收目的片段的方法很多，常用的有凍融法，低熔點(diǎn)瓊脂糖法，透析代法、電泳回收法、玻璃孔回收法等。本實(shí)驗(yàn)采用電泳回收法。通過(guò)特別的 V 形電泳槽，將挖出的含有目的片段的凝膠置于 V 形槽前，接通電泳電源， DNA 即進(jìn)入 V 形管中，回收 V 形管中溶液即可， V 形管較小，回收的 DNA 片段能保持較高的濃度。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 大量酶切產(chǎn)物的電泳分離：瓊脂糖為 0.8 %，選用大型電泳槽及厚梳子，并載低電壓下電泳以提高分辨率。
2. 紫外燈下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝膠。
3. 把凝膠片置于特制的 V 型槽平臺(tái)上，在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 電泳緩沖液(使其剛好淹過(guò)膠面)，再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ，接通電源進(jìn)行電泳。
4. 紫外燈下檢測(cè)凝膠塊是否含有 DNA ，判斷 DNA 是否全部進(jìn)入 V 形管溶液中。
5. 當(dāng) DNA 進(jìn)入 V 形管中，放掉電泳槽中的緩沖液，吸出 V 形管中的溶液。
6. 溶液加兩倍體積的*，混勻，置- 70 ℃ 兩小時(shí)或者- 20 ℃
7.1200rpm 離心 10 分鐘，沉淀用 70 %酒精洗一次，風(fēng)干，加入 10ul 與 8ul TE 及 1ul 載樣緩沖液混合，電泳檢查并根據(jù)帶的亮度估算其濃度。
三、注意事項(xiàng)
挖含目的 DNA 的凝膠時(shí)，盡量減少周圍凝膠的帶入。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心