標題：RCM RCM細胞株 細胞株培養

我公司認為購買細胞的客戶有培養細胞的經驗，客戶收到細胞后，因運輸途中細胞會有分泌物，所以原瓶中的培養液不能循環利用，將其全部倒掉，使用自己實驗室的培養基（試劑銷售推薦使用的培養基）

PS: 若客戶收到2ml小管細胞

收到細胞以后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作；然后將小管細胞轉移至T25培養瓶，加入5ml左右含FBS的培養基混勻，放入培養箱隔夜培養后查看細胞匯合度：若未超過80%匯合度，換液繼續培養，根據情況傳代或者凍存。若超過80%匯合度，可直接進行傳代。

客戶收到細胞后請務必仔細閱讀細胞注意事項，確保細胞的培養條件一致，如果由于培養條件不一致導致細胞出現問題，責任有客戶自行承擔。

1.  客戶在收到細胞時，請首先觀察培養瓶是否完好，培養液是否外滲，培養液是否混濁。如發現有瓶破、滲漏、培養液混濁等問題，請在收到細胞后立即與我們。

2.  由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請離心收集，重懸細胞，置培養箱培養，細胞會重新貼附于瓶壁。如果細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力。

3.  收到細胞時如無異常情況，請按照細胞處理方法處理細胞。

貼壁細胞處理方法

一、   細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。從細胞資源中心獲得細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。

二、   鏡下觀察：

未超過80%匯合度時，將瓶裝的*培養液移入無菌瓶中，留待日后培養用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養液，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，按要求比例消化傳代。（收到細胞，建議棄去原基培養，使用新鮮*培養基培養）

三、消化方法

1、將瓶裝的*培養液移入無菌瓶中，留待日后培養用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。（收到細胞，建議棄去原基培養，使用新鮮*培養基培養）

2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，棄上清，再加1ml消化液消化，顯微鏡下觀察，等細胞*脫離瓶壁分離成單個后，加培養基混勻，離心收集，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培養基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培養。

RCM RCM細胞株 細胞株培養

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