動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的基本要求

①清洗玻璃制品時(shí)，浸酸之后一定要用自來水沖洗10～15次。因?yàn)闅埓娴南匆簩?duì)細(xì)胞黏附有很大影響。清洗塑料制品時(shí)要用棉花或柔軟紗布擦洗。千萬不要用硬毛刷，否則損害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁。加樣器頭(Tip)和離心管(Tube)一定要用超聲清洗處理后逐個(gè)清洗．如沒有洗凈會(huì)影響下一次使用的效果。elisa試劑盒

②干熱滅菌時(shí)，應(yīng)在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免發(fā)生意外。當(dāng)溫度超過100℃時(shí)，不能玎開烤箱門。器皿烤完后，待溫度降至100℃之下才能開烤箱門。金屬器械、橡膠和塑料制品不能使用干熱滅菌方法。

③重高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干或烘干，以防包裝紙潮濕發(fā)霉：

④牛血清、大部分培養(yǎng)基、胰酶和一些生物制劑(如TdR，秋水仙素，谷氨酰胺，異硫氰酸胍，MOPS等)是有機(jī)溶液，均不能高壓。

⑤濾過除菌時(shí)，濾器在使用前先裝好濾膜(有時(shí)可在上面加一層定性濾紙)，包好，經(jīng)高壓滅菌后才能使用。濾過酶類制劑時(shí)應(yīng)待濾器溫度降至室溫后再進(jìn)行。過濾時(shí)壓力不宜過大，壓力數(shù)字以2為宜。壓力太大時(shí)微孔濾膜可能破裂，或使某些微生物變形而通過濾膜。裝濾膜時(shí)位置要準(zhǔn)確。另外濾器包裝時(shí)，螺釘不要擰得太緊，以防高壓蒸汽不能進(jìn)入，待高壓滅菌之后，再擰緊使用。

⑥使用化學(xué)消毒法時(shí)，配制。75％，酒精應(yīng)用衛(wèi)生級(jí)，不要用化學(xué)純、分析純和純酒精。來蘇兒水不能用于皮膚消毒，它對(duì)皮膚有刺激性。空氣消毒時(shí)，所有的物品要事先準(zhǔn)備齊全并使消毒者有較方便的退出途徑。因?yàn)榧兹┗蛉樗峒訜岷蠓懦龅恼魵鈱?duì)人的角膜和呼吸道上皮有嚴(yán)重的刺激和傷害作用。

1)實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前必須分門別類地制訂操作卡片，如清洗卡、消毒卡、細(xì)胞常用液(細(xì)胞培養(yǎng)液、BSS液、消化液)配制卡、牛血清檢測(cè)分裝卡、細(xì)胞原代和傳代操作卡等：各卡片上注明實(shí)驗(yàn)所需器材的名稱、規(guī)格、數(shù)量、操作要領(lǐng)和實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)等。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)按卡片收集、清點(diǎn)所需用品，一并放入超凈臺(tái)內(nèi)，這樣可避免操作時(shí)因物品不全而往返拿取所造成的污染：同時(shí)，根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)的要求，準(zhǔn)備好瓶管支架、器械消毒盒等。實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備數(shù)要大于實(shí)驗(yàn)使用數(shù)，瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù)。這樣才能有條不紊地做實(shí)驗(yàn)，也減少了忙亂操作所引起的污染。

2)無菌室和操作室消毒

無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1～2次。實(shí)驗(yàn)前，將實(shí)驗(yàn)器材放入超凈臺(tái)內(nèi)，打開超凈臺(tái)紫外線燈，同時(shí)啟動(dòng)超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)，40 min后消毒完畢，關(guān)閉紫外線燈。這樣，超凈臺(tái)內(nèi)空氣被凈化，超凈臺(tái)面構(gòu)成相對(duì)無菌的環(huán)境。

3)無菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端。如觸及，器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口)。

②減少手與器材的接觸面，學(xué)會(huì)手指操作。

③一切操作，如打開或封閉瓶口，安裝吸管、注射器等，都要在火焰前方進(jìn)行。瓶口、吸管、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用。

④瓶口順風(fēng)斜放在支架上。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長(zhǎng)時(shí)間敞開會(huì)增加落菌的機(jī)會(huì)。

⑤不同的細(xì)胞同時(shí)操作時(shí)，要專管，并要勤換吸管，防止擴(kuò)大污染和交叉污染。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶?jī)?nèi)。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再經(jīng)火焰消毒。

⑦操作者動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，盡量避免空氣流動(dòng)。
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4)實(shí)驗(yàn)中操作要求

洗手、著裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中，并用75％的酒精擦拭。細(xì)胞培養(yǎng)用液從冰箱取出，試劑瓶口和外壁經(jīng)酒精紗布擦洗后入超凈臺(tái)。超凈臺(tái)面要用酒精紗布擦拭。超凈臺(tái)上的物品面布局合理，污物廢液缸、酒精棉球缸在右側(cè)位，酒精燈在中央位，試劑瓶在左側(cè)位。拆除大包裝，點(diǎn)燃酒精燈(95％酒精)。火焰無色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少，酒精燃燒*(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精，這類酒精燃燒時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶、皿上，帶入培養(yǎng)液中會(huì)傷害細(xì)胞)。浸泡。75％酒精中的金屬器械用臺(tái)面消毒鑷子取出，經(jīng)無菌干紗布擦拭后，迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長(zhǎng)時(shí)間)，冷卻后使用，避免燙傷細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)液、牛血清、酶液的吸管，使用后不能再用火焰消毒，因?yàn)槲苤袣埩舻呐囵B(yǎng)液被燒焦碳化，再使用時(shí)，會(huì)把有害碳化物帶人培養(yǎng)液中毒害細(xì)胞。操作中手指被污染時(shí)，可用酒精紗布或棉球擦拭。在實(shí)驗(yàn)過程中，不要面向操作臺(tái)講話或咳嗽，避免將唾沫中微生物帶入超凈臺(tái)內(nèi)，污染空氣。實(shí)驗(yàn)者離開超凈臺(tái)時(shí)，立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口．避免無菌室內(nèi)細(xì)菌隨空氣流人凈化操作區(qū)。elisa試劑盒

5)實(shí)驗(yàn)后要求

實(shí)驗(yàn)完畢，關(guān)閉超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)和電源，未使用過的器材放入飯盒內(nèi)，用過的玻璃器材投入清水中浸泡，包裝紙疊卷，繩成束分類歸入，zui后，超凈臺(tái)面用酒精紗布或棉球擦拭，紫外線消毒。

6)注意事項(xiàng)

無菌操作離不開火和酒精，操作中避免事故發(fā)生。要用打火機(jī)點(diǎn)火。火柴點(diǎn)火時(shí)，火星德滅后投入廢缸內(nèi)(缸內(nèi)有廢酒精棉球)。酒精濺出臺(tái)面或瓶外壁時(shí)，立即擦干；一旦發(fā)生著火事故，立即關(guān)閉超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)，用飯盒、濕布撲滅火焰。