一、小量酶解反應(yīng) 
主要應(yīng)用于質(zhì)粒的酶切鑒定。10ul反應(yīng)體積中含1mg DNA，酶切反應(yīng)體系如下： 
質(zhì)粒dna 1mL 
10×緩沖液 1mL 
兩種限制酶各 0.5mL +0.5mL 
雙蒸去離子水 7mL 
總體積 10mL 

[操作方法] 
按下列順序加入試劑： 
(1)在一滅菌的新的Ep管中加入7ul雙蒸水。 
(2)加入10×緩沖液1mL 。 
(3)加限制酶Kpn I 0.5mL，Sac I 0.5mL。 
(4)zui后加入質(zhì)粒DNA lmL。 
(5)稍離心，混合。 
(6)37℃水浴1—1.5h。 
(7)取出后電泳分析鑒定是否酶解。

[注意事項(xiàng)] 
(1)雙蒸水為可變體積，當(dāng)其它反應(yīng)成分確定后，用雙蒸水將反應(yīng)體積補(bǔ)足。 
(2)質(zhì)粒DNAzui后加入，以防止操作不當(dāng)引起試劑的污染。 
(3) 大多數(shù)限制酶均加50％甘油緩沖液置于-20℃保存，其活力，穩(wěn)定，但在配制反應(yīng)混合物時(shí)，酶的加入量要準(zhǔn)確限制小于總體積的l／10，否則甘油會(huì)抑制酶解反應(yīng)。 

二、凍溶法從瓊脂糖凝膠中回收DNA 
在重組DNA或探針標(biāo)記等實(shí)驗(yàn)中，常常需要從凝膠中回收和純化DNA，常用的回收方法有：壓碎浸泡法、透析袋洗脫法、低熔點(diǎn)瓊脂糖法和DEAE—纖維素膜法等。 

[操作方法] 
(1) 從瓊脂糖凝膠中將含有擬回收DNA片段的膠塊切下，置于Ep管內(nèi)。 
(2) 用一次性注射器將膠由針頭處擠入Ep管內(nèi)，加等體積Tris平衡酚混勻后，置液氮10min。 
(3) 取出離心，5000g，5min。 
(4) 小心地將水相轉(zhuǎn)移至另一Ep管中。 
(5) 加等體積酚：氯仿（1：1）充分混勻。離心，5000g，5min。 
(6) 將水相轉(zhuǎn)移Ep管中，加等體積氯仿：異戊醇（49：1）充分混勻。 
(7) 離心，5000g，5min。 
(8) 在轉(zhuǎn)移出的水相中加1／10體積3mol乙酸鈉(pH5.2)和2.5倍體積的預(yù)冷的無水乙醇置-30℃30min。 
(9) 離心，12000g，15min． 
(10)棄上清，加預(yù)冷的70％乙醇1ml，12000g，離心5min。棄上清，室溫放置數(shù)分鐘。 
(11)將沉淀用20ul TE緩沖液(pH8.0)溶解，-20℃保存?zhèn)溆谩?/em>