Gibco|serana血清使用中常見問題

問：如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損？

答：將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。   長時間儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。  我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

問：血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理？  

答：沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產品性質。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

問：如何避免血清中產生沉淀？

答: 按如下操作可避免沉淀的產生：  

（1）解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。 

（2） 血清分裝凍存時，須規則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一。 

（3） 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。   （4） 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。  

（5） 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。 

（6） 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

問：如何選擇適合的血清？

國內一般選擇Hyclone和Gibco血清，在國外待過的科研工作者認為Gibco的比Hyclone好，這兩個品牌的價格都普遍偏貴，特別是Gibco 10099-141在2014年的價格飆到8000多元一瓶，此外，由于國內HYCLONE，GIBCO并沒有生產線，我們只能從代理商那里買，而代理商又魚龍混雜，所以買到假貨的可能性也很大。有的國外生物公司由于剛剛進入中國，度不高，但是其實在 國外已經做得很不錯了，如德國Serana血清，這個品牌的質量很好，品質和Hyclone不相上下，而且價格相對優惠很多，所以選擇Serana血清的老師，越來越多。

問：培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

答: 一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

問：為什么要熱滅活血清？

答：加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

問：有必要做熱滅活嗎? 

答：實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。   若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確保血清的質量!

問：細胞培養中出現黑點是污染嗎？如何處理？

答：一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。  

如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關： 

（1）細胞生長過老，破碎的細胞殘骸； 

（2）血清質量不好，反復凍融的結果； 

（3）配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長；  

（4）配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點； 

（5）培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

問：細胞培養中如何防止黑點生成？

答：1） 盡可能地減少血清凍融次數。  

（2） 培養基無需37℃水浴。   

（3） 培養基保持適合PH值7.0- 7.2。   

（4） 嚴格控制配制培養基的水質，容器定期刷洗。  

（5） 掌握細胞傳代的適合時機，細胞切勿生長過老。

（試劑銷售- Gibco|serana血清使用中常見問題）