細胞成活率形態學觀察法及檢測法

細胞成活率，判斷之形態學觀察法：

胞內出現顆粒或空泡。

細胞內如果出現顆粒物質，表明細胞處于非健康狀態。

同樣，細胞內出現空泡也說明細胞處于非健康狀態。

細胞喪失雙折射性：

1)如果發生在單層細胞：一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環），則提示該細胞已經死亡，即zui終干枯死亡。

2)如果發生在懸浮細胞：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內出現顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。

3)怎樣去除死細胞？單層培養的細胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處理。

4)懸浮細胞或原代培養細胞則要通過密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細胞。

細胞成活率檢測實驗:

即刻檢測實驗——

染料柜染實驗：原理——萘黑、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻，在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞；生長液；0.25%胰酶；PBSA.非滅菌材料即：血細胞計數板；生存力染料；巴斯德吸管；顯微鏡；手執計數器。操作步驟：

1)用胰蛋白酶消化或離心，重懸制備高深度的細胞懸液

2)取一塊干凈的血細胞計數板，將蓋玻片固定在適當位置上。

3)將一<滴細胞懸液和一滴（臺盼藍）或四滴（萘黑）染料混勻/li>

4)加至血細胞計數板的計數室中。

5)靜置1~2min（但不要放置很久，否則活細胞會受到損傷而吸收染料）。

6)將計數板置于顯微鏡下，用10倍物境找到計數網格。

7)計數細胞總及著色細胞的數目。

8)清洗血細胞計數板，放入盒內。

實驗分析-計算未著色細胞的百分數，該數字即為本方法所得出的細胞生存力百分數。

據統計，原代培養細胞成活率一般為50%~90%。細胞系一般為90%~100%存活。凍融細胞一般為50%~80%存活。

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