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免疫沉淀服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

來(lái)源:上海乾思生物科技有限公司   2015年09月01日 14:24  

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簡(jiǎn)介:世界*品牌免疫沉淀服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
免疫沉淀服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
材料
1,  蛋白A 或蛋白G
2,  一抗
3,  免疫沉淀緩沖液:20 mM 磷酸鈉, pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP40, 0.5% 脫氧膽酸鈉 and 0.02% *.
(> NOTE: 50 mM 醋酸鈉緩沖液, pH 5.0,. 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP-40 and 0.02%* 也可作為免疫沉淀的緩沖液,能提高蛋白G的結(jié)合功效)
4,  洗脫液:0.1 M 甘氨酸-HCl buffer, pH 2.5
5,  SDS-PAGE 上樣緩沖液 (pH 6.8): 2% SDS, 62.5 mM Tris 堿, 10% 甘油, 2-5% 
實(shí)驗(yàn)流程為:
1.用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細(xì)胞。刮去每塊板上的細(xì)胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。
2.將每毫升細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中,在微量離心機(jī)上4℃以zui大速度離心15 min。
3.收集上清(約30 ml)并加入30μg的適當(dāng)抗體,4℃搖動(dòng)免疫沉淀物1 h。
4.加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液,4℃搖動(dòng)免疫沉淀物30 min。
5.用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物,再重復(fù)洗5次。zui后,用NETN洗一次。
6.吸出混合物的液體部分。加入800μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中,煮沸4 min。
7.將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中,在10 mA的恒定電流下電泳。
8.通過(guò)考馬斯藍(lán)染色觀察蛋白質(zhì)泳帶。
9.從膠上切下目標(biāo)帶,將其放到微量離心管中,用1ml 50%乙腈洗兩次,每次3 min。
10. 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì),再將肽電洗脫。
11. 通過(guò)窄孔液相色譜分離肽。將收集的肽在ABI 477A或494A機(jī)器上進(jìn)行自動(dòng)Edman降解測(cè)序。

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