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流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

來源:上海拜力生物科技有限公司   2015年08月01日 15:45  

關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   
測序?qū)嶒?yàn)流程:
PI 染色操作步驟
1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,1500rpm , 5min,棄上清液。
2、加入PBS 1ml離心洗滌1次,棄上清。
3、加入2ml預(yù)冷的70%酒精,4℃固定30min,或是-20℃固定。
4、離心,棄上清液。
5、用1×PBS 1ml洗滌1次,離心。
6、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,37℃孵育30min,離心。
7、用1×PBS 1ml洗滌1次,離心。
8、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,室溫避光孵育30min。
9、混勻,過300目篩網(wǎng),置流式管中, 4℃冰箱保存,待測。
細(xì)胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,1500rpm,5min,棄上清液。
2、以冷PBA 1ml,離心洗滌,棄上清液。
3、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul。用微量移液器輕輕吹打混勻,4℃或置冰上孵育30min-1h。
4、離心棄上清液。
5、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
6、向細(xì)胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻,置流式管中,4℃避光保存,待測。
胞內(nèi)直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,1500rpm , 5min,棄上清液。
2、用1×PBS1ml洗滌1次,離心。
3、4%PFA 1ml,4℃固定30min。
4、用1×PBS1ml洗滌1次,離心。
5、0、1% Triton-100 1ml, 室溫10min。
6、用1×PBS1ml洗滌1次,離心。
7、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul,用微量移液器輕輕吹打混勻,4℃或置冰上孵育30min-1h。
8、離心棄上清液。
9、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
10、向細(xì)胞中加入冷PBS500ul,吹打混勻,置流式管中,4℃避光保存,待測。
備注:                                                
1、RNase A:貯液濃度:1mg/ml;
工作液配制:加1 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中,使終濃度為 20ug/ml。
2、PI:貯液濃度:2、5mg/ml;       
工作液配制:加2、5 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中,使終濃度為 50ug/ml。
3、PBA:即PBS加1-2% 牛血清白蛋白,加0、1%疊氮鈉。
4、檢測樣品細(xì)胞濃度1x106 /ml。
流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞表面抗原步驟
1. 定量細(xì)胞濃度
2. 分為2組,一組為實(shí)驗(yàn)組,另一組為抗體對(duì)照組
3. 兩組都先加入非特異性的IgG,封閉可能的Fc受體
4. 按照抗體生產(chǎn)廠家的推薦濃度加入抗體,對(duì)照組加入同樣熒光標(biāo)記的非特異性同型抗體。
5. 4°孵育半小時(shí)
6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍
7. 上機(jī)后先用抗體對(duì)照組設(shè)置陰性Gate。
8. 檢測樣本。
方法學(xué)程序
(1) 將適合于酶消化的組織置于離心管中;
(2) 將選好的酶溶液1-2ml加入盛有被消化組織的試管中;
(3) 一般消化20-30分鐘(恒溫37℃或室溫),消化期間要間斷振蕩或吹打;
(4) 終止消化,收集細(xì)胞懸液,以300目尼龍網(wǎng)過濾,除去細(xì)胞團(tuán)塊,以低速成離心除去細(xì)胞碎片;
(5) 將制備好的單細(xì)胞懸液進(jìn)行進(jìn)一步熒光染色后上機(jī)檢測,或保存?zhèn)溆谩?/p>

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