關鍵詞:抗體定制技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌抗體定制技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
抗體定制技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:
測序實驗流程:
抗體檢測服務
ELISA(酶聯免疫吸附實驗)
Dot Blot(斑點印跡實驗)
Western Blot(免疫印跡實驗)
IHC (免疫組織化學實驗)
抗體標記服務
HRP(辣根過氧化物酶)
Biotin(生物素)
操作方法
⑴準備好脾細胞。
⑵在50ml沉淀管中混合108脾細胞和107小鼠骨髓瘤細胞,并加入50ml2.5%FCS-1640液。
⑶室溫400g離心3min,使細胞沉淀。
⑷移去上清液。
⑸輕敲管底部,使沉淀流動,把沉淀管放于40℃水浴中,使其達融合溫度。
⑹加預熱至40℃的50%PEG0.8ml,用1ml吸管緩慢滴加,邊加邊搖沉淀管,肉眼觀察可見有顆粒出現,滴加過程要求持續2min。
⑺加1ml1640液,邊加邊搖動,持續1min。
⑻重復⑺一次。
⑼加1ml1640液,邊加邊搖動,持續0.5min。
⑽重復⑼一次。
⑾加1640液15ml。
⑿室溫,400g離心1min,使細胞沉淀。
⒀去上清,輕敲管底部,加25ml含有HAT的*1640液。
⒁往已于前一日種有飼養細胞的40孔塑料培養盤中滴加融合的細胞液,每孔1滴(約0.05ml)。
⒂輕搖后,放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。
⒃第3、6、9、10日換入含HAT的*1640培養液。注意輕輕吸取上清液,勿將固定于孔底的細胞吸出,根據需要加入適量的飼養細胞。
⒄于第12、15日加入含有HAT的*1640培養液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細胞生長出來。大多數雜交瘤細胞在10~20天內出現,但也有在1個月左右才能出現的。雜交瘤細胞出現后,吸取上清液,檢查抗體。
⒅對繼續生長的雜交瘤細胞進行增殖傳代。在傳代過程中,依情況取消HAT液和*1640液而代之以10%FCS-1640液。同時保存于液氮和進行克隆化,在這期間每代都要檢查抗體,以防止產生抗體細胞的變異和丟失。
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