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分子克隆和質粒載體構建技術服務|實驗技術服務

來源:上海拜力生物科技有限公司   2015年08月01日 13:46  

關鍵詞:分子克隆和質粒載體構建技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌分子克隆和質粒載體構建技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
分子克隆和質粒載體構建技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
分子克隆的相關載體:DNA段的克隆需要合適的載體,載體或是質粒,或是噬菌體,或是病毒,通常大多經過人工改造。作為載體必須具備兩條件:一是該載體在細胞內必須能自主復制,即必須具備復制原點;二是該載體必須具備適合的酶切位點,且這些酶切位點不在復制原點區域內。以上兩條,保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽隆克隆,載體上常有篩選標記,如對抗菌素的抗性,某些基因產物的顯色反應等。
服務要求: 
1、請以等形式告知我們服務的主要目的及具體要求。
2、提供外源DNA的來源及背景資料。DNA來源包括:PCR擴增產物;RT-PCR擴增產物;從其它質粒上酶切得到的DNA段等。
3、提供DNA段的電泳照片,并請標明Marker有濃度。
4、提供載體來源與背景資料。
5、注明克隆使用的酶切位點以及是否需要平端連接等。
相關材料說明: 
1、對于實驗材料中涉及病原體等危險材料不接受。
2、實驗中涉及的堿基序列請以的形式發到我中心。
3、實驗中的使用載體要盡量提供背景資料:(質粒大小,抗性,拷貝數,多克隆位點等)如果是商品化載體,請您提供生產廠家及標準名稱;如果所提供載體是您自己構建的請注明大體結構情況。
4、我中心可以提供常用的如(氨芐青霉素,氯霉素,卡那霉素)以外的抗生素需您提供。
5、您自己提供的引物如果為干品,請您標注具體的OD數,如果是液體態,請您標明濃度。
6、可以用甘油菌和穿刺菌形式郵寄菌體。(同時提供相應的質粒);如果提供質粒,則質粒的量在4ug以上;如果提供的是PCR產物,則PCR產物量在5u以上(附上電泳圖)
7、用于提取RNA/DNA的材料要新鮮。采樣時應首先在液氮中速凍,保存在-80度的冰箱中,使用干冰運輸。
載體DNA的選擇 
分子克隆載體
①質粒:質粒是細菌染色體外遺傳因子,DNA呈環狀,大小為1-200千堿基對(kb)。在細胞中以游離超螺旋狀存在,很容易制備。質粒DNA可通過轉化引入寄主菌。在細胞中有兩種狀態,一是"緊密型";二是"松弛型"。此外還應具有分子量小,易轉化,有一至多個選擇標記的特點。質粒型載體一般只能攜帶10kb以下的DNA段,適用于構建原核生物基因文庫,cDNA庫和次級克隆。
②噬菌體DNA:常用的λ噬菌體的DNA是雙鏈,長約49kb,約含50個基因,其中50%的基因對噬菌體的生長和裂解寄主菌是必需的,分布在噬菌體DNA兩端。中間是非必需區,進行改造后組建一系列具有不同特點的載體分子。λ載體系統zui適用于構建真核生物基因文庫和cDNA庫。
M13噬菌體是一種*的載體系統,它只能侵襲具有F基因的大腸桿菌,但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌內是雙鏈環狀分子,象質粒一樣自主復制,制備方法同質粒。寄主菌可分泌含單鏈DNA的M13噬菌體,又能方便地制備單鏈DNA,用于DNA順序分析、定點突變和核酸雜交。
③柯斯(Cos)質粒:是一類帶有噬菌體DNA粘性末端順序的質粒DNA分子。是噬菌體-質粒混合物。此類載體分子容量大,可攜帶45kb的外源DNA段。也能象一般質粒一樣攜帶小片段DNA,直接轉化寄主菌。這類載體常被用來構建高等生物基因文庫。

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