關(guān)鍵詞:單克隆抗體定制|實驗技術(shù)服務(wù)
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單克隆抗體定制|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫細胞化學(xué)的 技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強、親合力大、滴度高的特異性抗體，由于每種抗原都有幾個抗原決定簇，用它免疫動物將產(chǎn)生對各個決定簇的抗體，即多克隆抗體。單克隆抗體則是由一個產(chǎn)生抗體的細胞與骨髓瘤細胞融合而形成的雜交廇細胞經(jīng)無性繁殖而來的細胞群所產(chǎn)生的，所以它的免疫球蛋白屬同一類型，質(zhì)地純一，而且它是針對某一抗原決定簇的，因此特異性強，親合性也一致。
（一）動物的選擇與免疫
1．動物的選擇 純種BALB/C小鼠，較溫順，離窩的活動范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環(huán)境潔凈的實驗室均能飼養(yǎng)成活。目前開展雜交瘤技術(shù)的實驗室多選用純種BALA/C小鼠。
2．免疫方案 選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功，獲得高質(zhì)量的McAb至關(guān)重要。一般在融合前兩個月左右根據(jù)確立免疫方案開始初次免疫，免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原的特性不同而定。
（1）可溶性抗原免疫原性較弱，一般要加佐劑，半抗原應(yīng)先制備免疫原，再加佐劑。常用佐劑：福氏*佐劑、福氏不*佐劑。
初次免疫 抗原1～50μg加福氏*佐劑皮下多點注射或脾內(nèi)注射（一般0.8～1ml,0.2ml/點）
↓3周后
第二次免疫 劑量同上，加福氏不*佐劑皮下或ip（腹腔內(nèi)注射）（ip劑量不宜超過0.5ml）
↓3周后
第三次免疫 劑量同一，不加佐劑，ip（5～7天后采血測其效價）
↓2～3周
加強免疫，劑量50～500μg為宜，ip或iv（靜脈內(nèi)注射）
↓3天后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特別是一些弱抗原）的免疫方案也不斷有所更新，如：①將可溶性抗原顆粒化或固相化，一方面增強了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎(chǔ)免疫可直接采用脾內(nèi)注射。③使用細胞因子作為佐劑，提高機體的免疫應(yīng)答水平，增強免疫細胞對抗原的反應(yīng)性。
（2）顆粒抗原免疫性強，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。以細胞性抗原為例，免疫時要求抗原量為1～2×107個細胞。
初次免疫 1×107/0.5ml ip
↓2～3周后
第二次免疫 1×107/0.5ml ip
↓3周后
加強免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv