關鍵詞:Transwell實驗|實驗技術服務
簡介：世界*品牌Transwell實驗|實驗技術服務原裝，質量保證,*。
Transwell實驗|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時，我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
(1).共培養(yǎng)體系：
小于3.0um孔徑條件下，細胞不會遷徙通過，因此，若研究不涉及細胞運動能力，不需要細胞穿過聚碳酸酯膜，則應選擇3.0μm以下孔徑。常用0.4、3.0μm。我們實驗室用的是0.4μm。
將細胞A種于上室，細胞B種于下室，可以研究細胞B分泌或代謝產生的物質對細胞A的影響。
(2).趨化性實驗
可用5.0、8.0、12.0μm膜，上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室，計數(shù)進入下室的細胞量可反映下室成分對上室細胞的趨化能力。
①細胞B對細胞A的趨化作用：將細胞A種于上室，細胞B種于下室，可以研究細胞B分泌或代謝產生的物質對細胞A的趨化作用。
②趨化因子對細胞的趨化作用：將細胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。
(3).腫瘤細胞遷移實驗
常用8.0、12.0μm膜，上室種腫瘤細胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑，計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。
(4).腫瘤細胞侵襲實驗
常用8.0、12.0μm膜，原理與腫瘤細胞遷移實驗類似。
② 上層培養(yǎng)液：
上層培養(yǎng)液采用無血清培養(yǎng)基，為維持滲透壓，需加入0.05%-0.2% BSA。
③ 細胞：
值得注意的是，有侵襲能力的細胞才可用于Transwell侵襲實驗。建議實驗前先用酶譜法檢測MMPs的表達，特別是MMP-2的表達。如果不清楚細胞MMPs的表達情況，就盲目進行Transwell侵襲實驗，可能會造成不必要的浪費，一次Transwell侵襲實驗花錢少則數(shù)百，多則數(shù)千，并不是筆小數(shù)目，還是小心為妙。
另外，為了讓實驗結果更明顯，可先撤血清讓細胞饑餓12－24h，再進行實驗。
④ 基質膠：
常用的是人工重構基底膜材料Matrigel，主要成分為層黏連蛋白和Ⅳ型膠原，生產廠家有BD、美國Collaborative Rsearch公司等。CaoY戰(zhàn)友的帖這么說的：Matrigel是BD公司生產的，是一種細胞外基質，4度時是液體，在37度會逐漸凝固成膠狀，不可逆。同樣的東西在sigma叫ECM。zhangyong1036戰(zhàn)友提供的價格：BD公司的matrigel 1500左右。
如果購買的小室是已經鋪好基質膠的，那么Matrigel就不需要購買了。
⑤ 下層培養(yǎng)液：
下層常用含5%－10% FBS的培養(yǎng)基，具體濃度根據(jù)細胞侵襲力而定，侵襲力弱的細胞可適當提高FBS濃度。下層也可用趨化因子，有戰(zhàn)友將纖維粘連蛋白加入下層培養(yǎng)液作為趨化因子，但個人認為，F(xiàn)BS仍是zui合適的。
⑥ 細胞培養(yǎng)板：
常用于Transwell侵襲實驗的細胞培養(yǎng)板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔zui常用。細胞培養(yǎng)板沒什么特殊要求，普通的細胞培養(yǎng)板就可以。但要注意，細胞培養(yǎng)板應當與購買的Transwell小室相配套。
⑦ 此外，膜的下室面可涂上纖維粘連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N，Sigma有售)，這樣做的目的是使穿過膜的細胞更好地附著在膜上，也可用膠原（collagen）或明膠（gelatin）。很多戰(zhàn)友認為這不是必須的，而且我也是不涂的，細胞照樣貼壁很好。如果貼壁不好的話可以試試看。linanping1979戰(zhàn)友認為，如果培養(yǎng)時間很長（>24h），細胞還是會掉到下室里面去，所以有條件的話，還是在膜下層涂上FN。