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競爭抑制ELISA方法的檢測建立

來源:上海撫生實業有限公司   2015年06月09日 10:14  

一、 抗體的酶標記及質量鑒定
    ELISA試劑盒本試驗采用改良過碘酸鈉法將辣根過氧化物酶標記在抗體上[1],標記完后取上清用Sephedex G200 凝膠層析進行純化,洗脫液為0.2mol/L pH7.4的PBS,流速為15ml/h,分步收集,每支3ml,以紫外分光光度計測A280吸光度值,以洗脫體積為橫坐標,吸光值為縱坐標做圖,收集*峰即為酶標抗體峰。標記完后用紫外分光光度計在分別在280nm、及403nm處測定酶標記物的A值,計算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結合率以及標記率。
二、包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優化
1、包被緩沖液的優化
   ELISA試劑盒包被抗原時,為了得到*的包被效果,我們采用了碳酸鹽緩沖液(50mM ph9.6 )、磷酸鹽緩沖液(50mM ph7.6)、以及TRIS鹽酸緩沖液(50 mM ph7.6)三種緩沖液作為包被液,抗原包被濃度為5ug/ml,及2.5ug/ml,酶標抗體工作濃度為1:400及1:300,用自動酶標儀分析,選擇*的包被緩沖液系統。同時為了保證緩沖液能夠長期保存,我們在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作為防腐劑。
2、zui適抗原包被濃度的優化
   ELISA試劑盒用優化好的包被緩沖液,將包被抗原(ALB)稀釋成0.1ug/ml,1.0ug/ml,2.0ug/ml,4.0 ug/ml,6.0 ug/ml,8.0 ug/ml,10.0 ug/ml等六個濃度,包被微孔板,每孔100ul;競爭抗原濃度為4.0 ug/ml,2.0 ug/ml;酶標抗體稀釋度為1:300,經孵育、顯色、終止后用自動酶標儀分析。顯色的強度在一定范圍內與包被的抗原量成正比,但隨著包被抗原濃度的增加,顯色的強度反而降低,我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。
ANKRD20A3    錨蛋白重復結構域蛋白20A3抗體
ANKRD22    錨蛋白重復結構域蛋白22抗體
ANKRD50    錨蛋白重復結構域蛋白50抗體
ATP6V1G2    氫離子轉運ATP合成酶6G抗體
ANKRD26    錨蛋白重復結構域蛋白26抗體
ANKRD26    錨蛋白重復結構域蛋白26抗體
ACY3    丙型肝炎病毒核結合蛋白-1抗體
ARSK    芳香基硫酸酯酶K抗體
Amphiphysin    神經元突觸前膜蛋白抗體
Ankyrin G    錨定蛋白G抗體
Actin    肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體
ADAMTS1    整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型抗體
ADAMTS7(NT)    整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體 (N端抗體)
ADAMTS7    整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體
beta Adducin    內收蛋白抗體
ADFP    脂肪組織分化相關蛋白抗體
Adiponectin Receptor 1    脂聯素受體1抗體
ADM R    腎上腺髓質素受體抗體
Adiponectin    脂聯素抗體
ADM    腎上腺髓質素抗體
Adenosine A3 Receptor    腺苷受體A3抗體
ADRA2    ADRA2腎上腺素能受體2抗體

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