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單抗定制技術服務|實驗技術服務

來源:上海乾思生物科技有限公司   2015年06月02日 14:46  

關鍵詞:單抗定制技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌單抗定制技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
單抗定制技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
單克隆抗體(單抗)應用淋巴細胞雜交瘤技術將免疫動物的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,通過HAT篩選,ELISA抗體檢測,有限稀釋克隆化,選擇出具有分泌抗體功能又能無限繁殖的來源于單一B細胞的雜交瘤細胞,并產生抗體,就是單克隆抗體。單抗的zui大優勢是它的特異性、均一性、性和無限供應性。在免疫學、醫學、生物學等領域的基礎研究和臨床醫學上,包括對疾病(包括癌癥)的診斷、預防和治療等方面,均顯示出巨大的生命力。
實驗步驟:
1. 每種抗原免疫5只Balb/c小鼠
2. 選取ELISA效價較高的小鼠,取脾細胞與SP2/0細胞融合
3. 進行2~4次克隆化及ELISA篩選,確保雜交瘤細胞分泌抗體的穩定性
4. 抗體亞類鑒定
5. 至少選擇2株雜交瘤細胞的凍存,并免費提供一年的保種服務
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
細胞凍存:液氮凍存(基礎培養基+10%DMSO+20%FBS
細胞運輸:干冰運輸(1 Vial)或活細胞運輸(T-25 flasks
細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療詳細介紹
細胞培養是一種無菌操作技術,要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環境清潔、空氣清新,干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側,常規操作和封閉培養于一室,而洗刷消毒在另一室。 
所有細胞入庫之前均經過嚴格的細胞質量檢測和鑒定
所有細胞在出庫之前均經過一次嚴格的質檢認證
確保細胞到每一位用戶手里都是狀態
高質量ATCC產品對您的研究非常重要
1.細胞形態觀察。細胞膜是每天必須觀察的,看是否清晰,細胞的死亡往往是從細胞膜的破裂開始的,早期的表現就是細胞膜某一點出現欠完整或者毛發影。
2.細胞往往會有“抱團”現象,抱團生長或死亡,個人認為應該勤換液或傳代,盡量避 免細胞抱團。
3.細胞生長迅速,強烈建議用較大的培養瓶養,用小瓶養的話,換液不及時,很容易死 亡。細胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代,并且一般為一傳三,或一傳四。
4.培養液:1640培養液,1L一般加碳酸氫鈉2g,并加雙抗,胎牛血清濃度*為12%,zui低 不低于10%,HL60細胞對胎牛血清高度依賴。培養液PH應調為7.20-7.40之間。
5.防污染。HL60細胞生長迅速,較少發生污染,但常規措施應該做好。比如無菌操作,酒精 消毒等,培養瓶口建議過火,包括瓶蓋,應過火4秒左右。
6.凍存。-20一小時,-80液氮長期保存。強烈建議液氮長期保存,盡量不要在-80長期 保存,死亡率很高。
7.復蘇。調節水浴箱溫度為42℃,并提前在試管內放置10倍培養液,使培養液溫度與室溫一 致。1分鐘內融化細胞(禁止搖晃凍存管),移取至試管內,動作要輕,從試管管底開始慢慢上提 移液管,使細胞在培養液內分布均勻,離心,洗2次。
收到細胞后,取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個 瓶消毒后放到超菌 臺內,嚴格無菌操作,打開血管平滑肌細胞瓶,吸出培養液,僅留下 10ml培養液在瓶內繼續培養。
(二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如下:
1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中, 倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱,然后又將 培養瓶倒轉大約30 秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分 散,輕敲幾下培養培養瓶, 細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養基,吸出,分到新的培養瓶中。1:3~1:6 傳代;2~3天1次。
注意:傳代后一半用我們的培養基,一半用你們的,以免細 胞不適應而造成生長不好。
凍存方法:凍存液:基礎培養基 +5%DMSO+20%FBS
儲存:液氮儲存

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