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Transwell細胞遷移實驗服務|實驗技術服務

來源:上海乾思生物科技有限公司   2015年06月02日 14:38  

關鍵詞:Transwell細胞遷移實驗服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌Transwell細胞遷移實驗服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
Transwell細胞遷移實驗服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
檢測穿過的細胞數有兩種方法:
1 ) 直接計數法
“貼壁”細胞計數:
 “貼壁”是指細胞穿過膜后,可以附著在膜的下室側而不會掉到下室里面去。 通過給細胞染色,可在鏡下計數細胞
A. 用棉簽擦去基質膠和上室內的細胞
B. 染色:常用的0.1%結晶紫染色。
優點:(1) 不需固定細胞,直接染色即可。
(2) 配制簡單方便。
(3) 可以用33%醋酸脫色,測量洗脫液OD570值,間接反映細胞數
注意,染色前要將膜風干,否則可能會染不上。
C. 細胞計數:
(1) 顯微鏡進行觀察和拍照
(2) 取3-5個視野計數細胞個數
2) 間接計數法
用于穿過細胞過多,而無法通過計數獲得準確的細胞數。
MTT法
A. 棉簽擦去基質膠和上室內的細胞
B. 24孔板中加入500μl含0.5mg/ml MTT的*培養基,將小室浸沒于其中,置于37℃2-4h后取出。
C. 24孔板中加入500μl DMSO,將小室浸沒于其中,振蕩結晶充分溶解。
D. 取出小室,測所得DMSO的OD值。
結晶紫檢測
A. 棉簽擦去基質膠和上室內的細胞
B. (可選)甲醛固定30分鐘,室溫
B. 24孔板中加入500μl  0.1%結晶紫溶液,將小室浸沒于其中,室溫放置20分鐘
C. 24孔板中加入500μl 33%醋酸,將小室浸沒于其中,脫色。
D. 取出小室,測量洗脫液OD570值。
優點:染色和脫色的過程并不影響膜上細胞,在脫色后還可重新染色。
一、腫瘤細胞侵襲實驗(transwell)
原理:
模仿體內細胞外基質,細胞只有分泌基質金屬蛋白酶(MMPs),降解基質膠才可進入下室。
步驟
1.  Transwell小室準備
1)無基質膠Transwell小室制備
A. 包被基底膜:
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀釋,無血清培養基作為稀釋液
B. 取適量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),4℃操作。
C. 37℃培養箱中,孵育4-5h(>5h);出現“白色層”時,說明已經變為固態。
2)有基質膠Transwell小室制備
A. 小室放入培養板中,上室加入300μl預溫的無血清培養基
B. 室溫下靜置15-30min,使基質膠再水化
C. 再吸去剩余培養液。
2.細胞懸液準備
1)消化、收集細胞;
2)PBS洗1-2次
3)用含BSA的無血清培養基重懸(細胞密度約在1-10×105/ml)。
3. 細胞接種
1)取適量細胞懸液加入Transwell小室(按transwell說明)。24孔板小室一般200μl。
2)24孔板下室一般加入500μl含FBS或趨化因子的培養基。注意避免氣泡產生(下層培養液和小室間)
3) 培養細胞:常規培養12-48h(主要依癌細胞侵襲能力而定)。
4. 結果統計
注意點:
①Transwell小室:
注意是否是預先鋪好膠
② 上層培養液:
上層培養液采用無血清培養基,為維持滲透壓,一般加入0.05%-0.2% BSA。
③ 細胞:
有侵襲能力的細胞才可用于Transwell侵襲實驗。
④ 基質膠:
常用的是人工重構基底膜材料Matrigel
⑤ 下層培養液:
下層常用含5%-10% FBS的培養基,具體濃度根據細胞侵襲力而定,侵襲力弱的細胞可適當提高FBS濃度。
⑥ 細胞培養板:
細胞培養板應當與購買的Transwell小室相配套。

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