成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>解決方案>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

IP和Co-IP|實驗技術(shù)服務(wù)

來源:上海乾思生物科技有限公司   2015年06月02日 13:06  

關(guān)鍵詞:IP和Co-IP|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌IP和Co-IP|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
IP和Co-IP|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)可以:(1)測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;(2)確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔;(3)分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。
其原理是:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時,完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的proreinA預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后,beads上的proreinA就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
實驗材料    蛋白質(zhì)、試劑、試劑盒    RIPA BufferPBSProtein A agarose瓊脂糖考馬斯亮藍(lán)染色液
儀器、耗材    離心機(jī)搖床EP管細(xì)胞刮子離心管培養(yǎng)板電泳儀電泳槽液相色譜儀
試劑準(zhǔn)備 
1.  預(yù)冷PBS,RIPA Buffer,細(xì)胞刮子(用保鮮膜包好后,埋冰下),離心機(jī)。
2.  用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞兩次,zui后一次吸干PBS。
3.  加入預(yù)冷的RIPA Buffer(1 ml/107個細(xì)胞、10 cm培養(yǎng)皿或150 cm2培養(yǎng)瓶,0.5 ml/5×106個細(xì)胞、6 cm培養(yǎng)皿、75 cm2培養(yǎng)瓶)。
4.  用預(yù)冷的細(xì)胞刮子將細(xì)胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶上刮下,把懸液轉(zhuǎn)到1.5EP管中,4℃,緩慢晃動15 min(EP管插冰上,置水平搖床上)。
5.  4℃,14000 g離心15 min,立即將上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中。
6.  準(zhǔn)備Protein A agarose,用PBS 洗兩遍珠子,然后用PBS配制成50%濃度,建議減掉槍尖部分,避免在涉及瓊脂糖珠的操作中破壞瓊脂糖珠。
7.   每1 ml總蛋白中加入100 μl Protein A瓊脂糖珠(50%),4℃搖晃10 min(EP管插冰上,置水平搖床上),以去除非特異性雜蛋白,降低背景。
8.   4℃,14000 g離心1 5min,將上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中,去除Protein A珠子。
9. (Bradford 法)做蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線,測定蛋白濃度,測前將總蛋白至少稀釋1:10倍以上,以減少細(xì)胞裂解液中去垢劑的影響(定量,分裝后,可以在-20℃保存一個月)。
10.  用PBS將總蛋白稀釋到約1 μg/μl,以降低裂解液中去垢劑的濃度,如果興趣蛋白在細(xì)胞中含量較低,則總蛋白濃度應(yīng)該稍高(如10 μg/μl)。
11.  加入一定體積的兔抗到500 μl總蛋白中,抗體的稀釋比例因興趣蛋白在不同細(xì)胞系中的多少而異。
12.  4℃緩慢搖動抗原抗體混合物室溫2h,激酶或磷酸酯酶活性分析建議用2 h室溫孵育。
13.  加入100 μl Protein A瓊脂糖珠來捕捉抗原抗體復(fù)合物,4℃緩慢搖動抗原抗體混合物室溫1 h,如果所用抗體為鼠抗或雞抗,建議加2 μl"過渡抗體"(兔抗鼠IgG,兔抗雞IgG)。
14.  14000 rpm瞬時離心5 s,收集瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物,去上清,用預(yù)冷的RIPA buffer洗3遍,800 μl/遍,RIPA buffer有時候會破壞瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物內(nèi)部的結(jié)合,可以使用PBS。
15.  用60 μl 2×上樣緩沖液將瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物懸起,輕輕混勻,緩沖液的量依據(jù)上樣多少的需要而定(60 μl足夠上三道)。
16.  將上樣樣品煮5 min,以游離抗原,抗體,珠子,離心,將上清電泳,收集剩余瓊脂糖珠,上清也可以暫時凍-20℃,留待以后電泳,電泳前應(yīng)再次煮5 min變性。
免疫共沉淀反應(yīng) 
1. 轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細(xì)胞,加入適量細(xì)胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30 min,細(xì)胞裂解液于4°C,zui大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清;
2. 取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育;
3. 取10 μl protein A 瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3 次,每次3 000 rpm離心3 min;
4. 將預(yù)處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4 h,使抗體與protein A瓊脂糖珠偶連;
5. 免疫沉淀反應(yīng)后,在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1 ml裂解緩沖液洗3-4次;zui后加入15 μl的2×SDS 上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;
6. SDS-PAGE,Western blotting或質(zhì)譜儀分析。
通過免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白 
1.用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細(xì)胞。刮去每塊板上的細(xì)胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中;
2.將每毫升細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中,在微量離心機(jī)上4℃以zui大速度離心15 ;
3.收集上清(約30 ml)并加入30 μg的適當(dāng)抗體,4℃搖動免疫沉淀物1 h;
4.加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液,4℃搖動免疫沉淀物30 min;
5.用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物,再重復(fù)洗5次。zui后,用NETN洗一次;
6.吸出混合物的液體部分。加入800 μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中,煮沸4 min
7.將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中,在10 mA的恒定電流下電泳;
8.通過考馬斯亮藍(lán)染色觀察蛋白質(zhì)泳帶;
9.從膠上切下目標(biāo)帶,將其放到微量離心管中,用1 ml 50%乙腈洗兩次,每次3 min;
10. 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì),再將肽電洗脫;
11. 通過窄孔液相色譜分離肽。將收集的肽在ABI 477A或494A機(jī)器上進(jìn)行自動Edman降解測序。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 国产亚洲欧美日韩综合综合二区| 欧美人与性动交α欧美精品| 无码日本精品一区二区三| 国产精品大陆在小视频| 色就色欧美综合网站| 777婷婷天堂综合区色吧| 国产专区_爽死777| a级高清毛片| 亚洲国产精品无码中文在线| 国产欧美一区二区三区精品视| 免费观看日韩欧美| 欧美亚洲精品在线播放| 亚洲男人的天堂在线无码| 日本亚洲精品无码区国产电影| 孕妇被大肉楱征服小说| 中文一区二区三区亚洲欧美| 欧美精品午夜久久久久久| 亚洲男人性天堂| 日韩亚洲综合精品国产| 无码国产手机在线a√片无| 午夜色情影视免费播放| 嗯真紧又湿又软| 精品免费国产一区二区三区四区| 男人亚洲天堂av| 美女图片脱空一点不露| 中文字幕一区二区三区精华液| 久久精品AV无码一区二区小说| 人妻精品国产一区二区| 欧美国产精品久久久乱码| 男女生爽爽爽视频免费观看| 欧美日韩在线成综合| 区亚洲综合第1页| 亚洲熟女熟妇天堂| 要看欧美黄片免费| 久久久久久中文字幕有精品| 欧美激情刺激爽免费视频观看| 精品人妻无码一区二区三区葡京| 好涨嗯太深了嗯啊用力停| 黑料网今日黑料首页| 国产日韩欧美视频在线播放| 亚洲国产欧美中文字幕|