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SDS-PAGE膠染色

來源:上海士鋒生物科技有限公司   2015年06月01日 08:50  

一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較

染色方法靈敏度與質譜的兼容性
Silver1- 10ng -
Silver (MS compatible)10ng+
Comassie G -250 or R-250>30ng+
Antibody(Western blot)1ng-


二、考馬斯亮藍染色   

CBB 染色液:0.5%考馬斯亮藍 G250 或 R250;40%甲醇;10%乙酸;將 CBB 溶于甲醇中并不停的攪拌 15min。

加入乙酸與 ddH2O 脫色液:30%甲醇;10%乙酸

染色方法:1. 在搖床上染色 30min;2. 脫色至蛋白點或條帶清晰可見;3. ddH 2O 洗 3-5 次。

三、膠體考馬氏亮藍染色 ColloidalCoomassie Staining(Cambridgecentrefor porteomics)

sensitivity = ~100ng

1. 固定:甲醇/ 醋酸/H 2O(45:1:54)至少 20min.

2. 染色 12-18hr。

染色液: 17% (w/v) 硫酸銨;34%甲醇;0.5%醋酸;0.1% (w/v) CoomassieG250。

3. 脫色:用 H 2O 脫色至蛋白點和背景清晰.

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