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微生物菌群多樣性分析(DGGE)服務|實驗技術服務

來源:上海乾思生物科技有限公司   2015年05月21日 08:09  

關鍵詞:微生物菌群多樣性分析(DGGE)服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌微生物菌群多樣性分析(DGGE)服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
微生物菌群多樣性分析(DGGE)服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:微生物菌群多樣性分析(DGGE)服務|實驗技術服務   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
DGGE是根據DNA在不同濃度的變性劑中解鏈行為的不同而導致電泳遷移率發生變化,從而將片段大小相同而堿基組成不同的DNA片段分開。具體而言,就是將特定的雙鏈DNA片段在含有從低到高的線性變性劑梯度的聚丙烯酰胺凝膠中電泳,隨著電泳的進行,DNA片段向高濃度變性劑方向遷移,當它到達其變性要求的zui低濃度變性劑處,雙鏈DNA形成部分解鏈狀態,這就導致其遷移速率變慢,由于這種變性具有序列特異性,因此DGGE能將同樣大小的DNA片段很理想地分開,它是一種很有用分子標記方法。現已廣泛應用于生物多樣性調查、親緣關系鑒定、基因突變檢測等多個領域。
主要步驟
DGGE對微生態的分析一般包括三個步驟:核酸提取,16SrRNA序列的PCR擴增以及DGGE指紋圖譜分析。有些學者通過克隆、測序建立微生物區系的16SrRNA/DNA文庫,通過系統發育分析,建立進化樹,從而獲得微生物多樣性信息,但這種方法相對于指紋圖譜技術來說,費時費力,價格也相對昂貴。
核酸提取
微生物總DNA的提取是整個分子生物學技術的基礎,是否能獲得具有代表性的總DNA樣品將決定后續分析的可行性。一般認為微生物提取總DNA的方法分為細胞裂解和核酸抽提兩個步驟。細胞裂解有三種:機械法、化學法和酶法。機械法包括玻璃珠法、超聲波法、凍融法等;化學法包括加入SDS、苯酚等;酶法包括加入裂解酶、蛋白酶K 和溶解酶等。而許多研究者用其中兩種或三種方法進行組合,發現組合后提取總DNA 的效果較好。Stahl等(1988)在含有SDS和酚的體系中加入適量的玻璃微珠DNA螺旋
DNA螺旋,機械法裂解瘤胃樣品中的菌體細胞。
16SrRNA基因序列的PCR擴增 
細菌的核糖體RNA按沉降系數分為5S、16S和23S三種,16SrRNA基因是細菌染色體上編碼該rRNA的相應DNA系列。16SrRNA基因序列全長1540bp ,有保守區和可變區之分,每種細菌的保守區都是相同的,能反映生物種類的親緣關系,為系統發育重建提供線索;可變區因細菌種類而異,通過保守區設計引物,擴增出可變區,就可以得知微生物多樣性信息。
DGGE指紋圖譜分析
DGGE電泳圖譜的分析zui常用的是相似性聚類分析法。DGGE 膠通過掃描儀輸入計算機,通過Molecular Analysis軟件進行相似性分析。通過DGGE后得到的指紋圖譜,每一條帶代表某個微生物優勢菌群,通過測序和序列比對,可以得出此優勢菌群的種類。
DGGE具有如下的優點:
(1)突變檢出率高。DGGE的突變檢出率為99%以上。
(2)檢測片段長度可達1kb,尤其適用于 100~500bp的片段。
(3)非同位素性。DGGE不需同位素摻入,可避免同位素污染及對人體造成的傷害。
(4)操作簡便、快速。DGGE一般在24小時內即可獲得結果。
(5)重復性好。但是,該方法需要特殊的儀器,而且合成帶GC夾的引物也比較昂貴。

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