、細胞因子的概念
細胞因子(cytokine)是由機體多種細胞分泌的小分子蛋白質,通過結合細胞表面的相應受體發揮以調節免疫應答為主的生物學作用。細胞因子具有 非常廣泛的生物學活性,包括促進靶細胞的增殖和分化,增強抗感染和細胞殺傷效應,促進或抑制其它細胞因子和膜表面分子的表達,促進炎癥過程,影響細胞代謝 等。
二、細胞因子的命名
細胞因子按其來源可分為:由單個核吞噬細胞產生的細胞因子稱為單核因子(monokine);由淋巴細胞產生的細胞因子稱為淋巴因子 (lymphokine)等。按其作用可分為干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、生長因子和趨化因子等。部分由不同細胞分泌的細胞因子,其基因及編碼蛋 白與結構清楚者,在免疫調節、造血和炎癥中發揮重要作用,又稱為白細胞介素(interleukin,IL)。也可以依據結構或者其受體結構分類,我們的 趨化因子目前沒有受體產品。
三、細胞因子的特征
1、低分子量;一般為<60kD的多肽或糖蛋白。多以單體形式存在,少數為二聚體,三聚體。
2、天然細胞因子由抗原、絲裂原或其他刺激物活化的細胞所分泌,通過旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或內分泌(endocrine)方式在局部發揮短暫作用。
3、一種細胞因子可由多種細胞產生,同一種細胞可產生多種細胞因子。
4、需通過與靶細胞表面相應受體結合后發揮其生物學效應。
5、具有性、多效性、疊性、拮抗性、協同性和網絡性。
四、細胞因子的分類
1、白細胞介素(interleukin,IL-s)
zui初是指由白細胞產生又在白細胞間發揮作用的細胞因子。
2、干擾素(interferon,IFN)
zui早發現的細胞因子,有干擾病毒感染和復制的能力。分α、β和g三種類型。
3、腫瘤壞死因子超家族(tumor necrosis factor,TNF)
1975年發現的一種能使腫瘤發生出血壞死的物質。
4、集落刺激因子(colony-stimulating factor,CSF)
指能夠刺激多能造血干細胞和不同造血祖細胞增殖分化,在半固體培養基中形成相應細胞集落的細胞因子。包括G-CSF(粒細胞)、M-CSF(巨噬細胞)、 GM-CSF(粒細胞、巨噬細胞)、Multi-CSF(多重)(IL-3)、紅細胞生成素(EPO)、干細胞生長因子(SCF)、血小板生成素 (TPO)等。
5、趨化因子(chemokine)
主要功能是招募血液中的單核細胞、中性粒細胞、淋巴細胞等進入特定的淋巴器官和組織以及感染發生的部位。根據趨化因子近N端半胱氨酸(Cys)的位置、排列方式和數量,可分為CC、CXC、C、CX3C四個亞家族。
6生長因子(growth factor,GF)
生長因子(GF)是具有刺激細胞生長作用的細胞因子。
五、細胞因子的生物學活性
1.介導自然免疫、參與抗腫瘤和抗感染
2.調節T、B細胞活化、生長和分化,介導細胞免疫和體液免疫
3.刺激造血生成、刺激骨髓祖細胞生長和分化為各種成熟血細胞
4.在炎癥、感染和內毒素血癥中的作用
5.在超敏反應和自身免疫病中的作用
6.細胞因子通過激活其相應受體(CKR),導致細胞的增殖與分化或分泌某種蛋白質。
六、四種蛋白表達體系比較
表達 | 細胞 | 優點 | 缺點 |
原核 | E. coli | 繁殖快、成本低、產量高 遺傳背景及基因表達調控機制清楚 易于大規模培養,成本低廉 | 蛋白常為包涵體,純化困難 無糖基化(分泌蛋白,細胞膜上蛋白不可用),生物活性不定 無翻譯后修飾,內毒素含量高 |
酵母 | Pichia | 使用簡單,表達量高,His-tag便于純化,一定的翻譯后加工可進行糖基化修飾,操作簡單,適合大規模生產 可誘導表達,也可分泌表達,產物便于純化 | 有時會出現蛋白切割問題 糖基化不能滿足要求 |
昆蟲 | High-5 | 產量高 ,翻譯后加工與哺乳動物相似 對于部分有毒性或較難表達蛋白有優勢 無內毒素污染 | 蛋白活性不如哺乳動物 適合表達激酶等定位于細胞內的真核蛋白 |
哺乳 | CHO HEK293 | 完善的翻譯后加工,活性接近天然蛋白 | 周期長、技術要求高 表達產量低 |
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