牛血清白蛋白殘留量測(cè)定法
本法系用酶聯(lián)免疫法測(cè)定供試品中牛血清白蛋白(BSA)含量量,以判斷供試品中BSA殘殘留量是否符合規(guī)定的檢測(cè)方法。以牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn),采用直線(xiàn)回歸方法計(jì)算供試品中牛血清白蛋白含量。
供試品溶液的制備 供試品如為凍干劑型, 檢測(cè)前應(yīng)按標(biāo)示量復(fù)溶后震蕩混勻,室溫靜置30分鐘,檢測(cè)前應(yīng)再次震蕩混勻。供試品如為液體劑型可直接用于檢測(cè)。采用試劑盒提供的供試品稀釋液稀釋供試品,供試品應(yīng)至少進(jìn)行兩個(gè)稀釋度測(cè)定,每個(gè)稀釋度做雙孔平行測(cè)定。測(cè)定BSA含量的容器具應(yīng),防止實(shí)驗(yàn)室中BSA污染。
干擾試驗(yàn) 制備溶液A(供試品溶液倍比稀釋?zhuān)?、B(供試品溶液和30ng/ml的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)品等量混合)和C(30ng/ml的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋?zhuān)?。其中,供試品溶液BSA含量高于試劑盒測(cè)定范圍中點(diǎn)時(shí),兩倍稀釋后制備溶液A和B。溶液A、B可倍比稀釋測(cè)定,溶液C應(yīng)多孔測(cè)定,并在試驗(yàn)間均勻添加。 測(cè)定法 按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值(A值)、內(nèi)控參考品測(cè)定值、標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)、雙孔測(cè)定吸光度值(A值)均應(yīng)在試劑盒要求范圍內(nèi),試驗(yàn)有效。以試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值(A值)和濃度制定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)供試品的A值計(jì)算供試品中BSA含量,按試劑盒說(shuō)明書(shū)要求判定zui終結(jié)果。 供試品測(cè)定時(shí),低稀釋度A值明顯低于高稀釋度A值時(shí)可能存在HOOK效應(yīng)或操作失誤,需重試或調(diào)整稀釋倍數(shù)進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用該試劑盒的供試品應(yīng)進(jìn)行干擾試驗(yàn)。干擾試驗(yàn)中B-A值應(yīng)在C值測(cè)定的95%可信區(qū)間內(nèi)。
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