新生小牛血清制備

一、目的:

為了保障新生小牛血清產(chǎn)品質量的均一性和穩(wěn)定性，制定以下操作方法，以規(guī)范新生小牛血清生產(chǎn)制備。

二、操作方法：

（一）采血

1. 挑選出生在48小時以內的新生小牛，空腹8小時以上，以便排空腹內母乳。
2. 將小牛清洗干凈后，側放在萬級潔凈房間內的采血臺上，固定四肢及頭部。
3. 用來蘇水清洗小牛頸部，刮去頸部牛毛，露出頸部一側皮膚，用2%碘酒擦拭消毒。
4. 在脖頸處切開一道10~20厘米的切口，避免切到血管，取出血管，用止血鉗夾住血管近心端，在遠心端除去血管包膜，分離出動脈血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，切開1厘米左右的切口進行插管，插好管后打開近心端的止血鉗，讓牛血順采血管流入另一個潔凈房間內的采血瓶中。
5. 采血瓶采血前經(jīng)干烤滅菌（180℃ 2小時）后，按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口，于采血前半小時放入37℃恒溫箱備用。采血前先晃動瓶內生理鹽水，使其充分濕潤瓶壁后倒出，再進行采血并加塞封口。
6. 將采血后的采血瓶放37℃ 恒溫室2小時，再放入4℃冷庫 4小時以備離心。

（二）離心

將準備好的采血瓶放入離心套筒調好平衡后，對稱放入離心機，按1800轉/分鐘 離心50分鐘后，放入4℃冷庫備用。

（三）抽血清

      取出4℃冷庫離心好的采血瓶，注意輕抬輕放，以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器，再接到壓縮機抽氣口上。打開壓縮機，用抽血清孔的管子輕輕抽取采血瓶內的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝，即為粗制血清，放入-20℃冷庫冷藏備用。

• 血清過濾

1. 將-20℃冷庫內的粗制血清取出化凍。
2. 將化凍后的粗制血清用經(jīng)過高壓滅菌的8層紗布進行初濾。
3. 把初濾后的血清倒入大罐進行混合。
4. 將裝好濾芯的濾器做密封性試驗和發(fā)泡試驗合格后，經(jīng)過高壓滅菌，在潔凈室內用無菌操作法將濾器按濾柱孔徑由大到小的順序進行組裝，并裝上壓力表。把濾器大孔徑一端和蠕動泵出口進行連接。
5. 用蠕動泵將大罐內的血清送入濾器進行過濾。
6. 將濾出的血清在百級凈化操作臺上進行分裝后，即為精制小牛血清，送-20℃冷庫儲存。

三、注意事項：

1、在操作過程中，要經(jīng)常用75%的酒精對手部進行消毒，同時避免接觸牛血或血清，特別是有傷口的部位，以免感染。

2、在采血插管過程中，插管避免接觸到未消毒的部位，盡量深入血管，使牛血能快速流完為好，并固定好插管，避免脫離動脈血管。

3、在抽血清的過程中，控制好壓縮機的壓力大小，避免壓力過大，抽到下層的沉淀物。

4、在過濾過程中，控制好壓力的大小，避免超過濾柱工作壓力。