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血清使用說明

來源:廣州譽(yù)維生物科技儀器有限公司   2014年11月12日 16:40  

胎牛血清與小牛血清 : 某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。
儲(chǔ)存條件 : 血清一般儲(chǔ)存于-20℃,同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過一個(gè)月。
血清中絮狀沉淀的處理 : 沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。  離心血清(400g,1-2分鐘)或簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里。  大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。  一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無法過濾。
使用濃度:  一般為5-20%,zui常用是10%。過多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化,特別是一些二倍體的無限細(xì)胞系,迅速生長(zhǎng)之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
解凍方法:  血清從冰箱取出后應(yīng)慢慢地解凍。在4℃低溫冰箱里放置一天或直到*融化為止。如果時(shí)間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法:   
 1. 將血清從冰箱里取出后,在室溫下放置15-20分鐘。 
 2. 然后將血清放置在37℃水浴槽里。過高溫度會(huì)導(dǎo)致血清出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子。 
 3. 每隔5分鐘左右適當(dāng)搖晃瓶子,直到*地解凍為止。 
熱滅活方法 : 加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。 
2. 在血清解凍時(shí),將一個(gè)容器裝入適量的水,用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測(cè)瓶?jī)?nèi)水的溫度。容器大小、質(zhì)地和裝水的量與裝血清的瓶子相同或相似。 
3. 待血清*解凍時(shí),將含有血清的瓶子放在預(yù)熱的56℃水浴里,不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子,以免導(dǎo)致污染。  
4. 在開始加熱處理時(shí),要及時(shí)使用溫度計(jì)測(cè)定模擬瓶?jī)?nèi)水的溫度。  
5. 在預(yù)熱期間,每隔3-5分鐘要適當(dāng)搖晃含有血清和水的瓶子,確保瓶?jī)?nèi)液體均勻加熱。 
6. 一旦模擬瓶?jī)?nèi)的水溫達(dá)到55.8±0.5℃時(shí),開始計(jì)時(shí),并在此溫度范圍內(nèi)熱處理30分鐘,然后立即放在冰上冷卻。  
為防止在熱處理過程中由蛋白質(zhì)變性而導(dǎo)致的渾濁和沉淀現(xiàn)象,熱處理時(shí)應(yīng)注意下 列事項(xiàng):  
1. 不要用高于25℃以上的溫度加快解凍速度。 
2. 在熱處理之前,要使血清*融解。  
3. 不要使熱處理的溫度高于56.3℃ 4. 熱處理時(shí)間不要長(zhǎng)于30分鐘。 
5. 在加熱過程中一定要定時(shí)搖動(dòng)血清。
避免事項(xiàng): 避免反復(fù)凍融  長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。  避免產(chǎn)生沉淀  解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
血清分裝時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。  勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。 勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
建議事項(xiàng): 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。(100U/mL青霉素;100µg/mL鏈霉素)  
500ml血清分裝過程:
準(zhǔn)備滅菌的血清瓶  慢慢解凍,zui后放在室溫平衡下溫度。  滅活  水浴鍋,56℃,30分鐘,并且隨時(shí)搖晃均勻。取出,立即放在冰上冷卻|自然冷卻至室溫(約需1-3小時(shí))。在熱滅活過程中,定時(shí)適當(dāng)搖動(dòng)可以減少沉淀現(xiàn)象的發(fā)生。  無菌分裝  轉(zhuǎn)入無菌間,在超凈臺(tái)內(nèi)將血清分裝入50-100ml血清瓶中(注意預(yù)先要將血清輕輕搖動(dòng)數(shù)周、混勻;用吸液管吹出血清時(shí)要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡,則在酒精燈火焰上過一下)封口,并于-20℃保存?zhèn)溆谩?nbsp; 使用前融化,置于4℃融化。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

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