Vero細胞傳代方法

 一、傳代前準備 

1. 用75%酒精棉球擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。 

2. 正確擺放使用的器械，保證足夠的空間，不僅便于操作，而且減少污染。

3. 點燃酒精燈，注意火焰不能太小。 

4. 取出室溫保存的培養(yǎng)液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

二、傳代步驟： 

1. 從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細胞，注意取出細胞時不要碰到瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微 鏡的臺面，再在鏡下觀察細胞。 

2. 打開瓶口：將各個瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

3. 倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基。 

4. 加入500ul/小瓶（培養(yǎng)面積___cm2)的胰酶（4度中可存放幾個月）,并晃動 瓶子,使液體浸潤瓶底。

5. 將瓶置入孵箱約2-3分鐘。 

6. 目測觀察,見細胞層出現(xiàn)針狀小孔，折光增加，棄去胰酶。

7. 加入3ml的DMEM培養(yǎng)基稀釋,注意更換吸管。 

8. 吹打15-20次左右,剛開始輕吹5次左右，然后用力吹，使細胞良好地分散 成單個細胞，鏡下觀察。

 9. 一傳2，作好記號，置37℃，5%CO2孵箱。

10. 一般2-3天長滿。

注意事項： 

1. 操作過程中不能碰到瓶蓋； 

2. 加培養(yǎng)液前移液管燒后先在培養(yǎng)基內(nèi)回吸一次； 

3. 試驗結(jié)束后用完的移液管要馬上用水沖洗干凈，再浸泡在洗衣粉溶液內(nèi)；

4. 胰酶消化不開細胞的，可能是胰酶失效或者細胞老化； 

5. 如果細胞長滿不能及時傳代就放在室溫下第二天傳，但是只能放一天；

6. 生長液5%-10%血清，維持液2%-5%血清。  小瓶1傳2小瓶  中瓶1傳4小瓶（或2中瓶）