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方法一:直接測序法進行SNP分析
在所有SNP的檢測方法中,對欲檢測片段進行直接擴增、測序是zui為準(zhǔn)確的方法。通常情況下,純合型SNP位點的測序峰為單一峰型,而雜合型SNP位點的測序峰為套峰,因而很容易將其區(qū)分開來。通過直接測序方法進行SNP檢測的檢出率接近100%。
方法二:PCR-SSCP方法
單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析是一種簡單、地檢測DNA或RNA序列中點突變的技術(shù),由于實驗成本較低,也是一種目前較為常用的方法。
★ zui后,上海恒遠高質(zhì)量培養(yǎng)基提醒您,這其中需要注意的問題:
1、PCR-SSCP只能作為一種突變檢測方法,要zui后確定突變的位置和類型,還需進一步測序。
2、由于SSCP是依據(jù)點突變引起單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變來實現(xiàn)電泳分離的,這樣就可能會出現(xiàn)當(dāng)某些位置的點突變對單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變不起作用或作用很小時,再加上其他條件的影響,使聚丙烯酰胺凝膠電泳無法分辨造成漏檢。
3、經(jīng)實驗證明小于300bp的DNA的片段中的單堿基突變,90%可被SSCP發(fā)現(xiàn)。
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