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吞噬細胞吞噬功能檢測

來源:上海士鋒生物科技有限公司   2014年01月06日 08:13  

一、基本原理 
吞噬細胞具有對異物(細菌、綿羊紅細胞、雞紅細胞等)吞噬和消化的功能,在機體固有免疫中發揮重要作用。 小鼠腹腔內注射硫代乙醇酸鈉,可刺激巨噬細胞的聚集。四日后小鼠腹腔內注入羊紅細胞懸液,一小時后解剖收集腹腔吞嗜細胞,染色、鏡檢可觀察對羊紅細胞的吞嗜現象。通過計算吞嗜百分比或吞噬指數可測定吞噬細胞的吞嗜功能。 

二、材料 
1. ICR品系小鼠(北京大學醫學部實驗動物中心提供) 
2. pbs緩沖液 
3. 3%硫代乙醇酸鈉 
4.羊紅細胞(1%懸液,北京大學醫學部實驗動物中心提供) 
5. 解剖器材、注射器、尖吸管、橡皮吸頭、小試管及載玻片、 
6. 瑞氏染液、甲醇 

三、實驗方法 
1. 實驗準備:用無菌注射器吸取3%硫代乙醇酸鈉3ml,注射于小鼠腹腔內。 
2. 四日后,注射羊紅細胞(1%懸液)1ml于小鼠腹腔內。 
3. 注射1小時后,將小鼠用頸椎脫臼法處死,解剖暴露腹腔,于腹腔靠上部位,用鑷子輕輕夾起腹膜,將腹膜剪一小口,用尖吸管注入5ml預溫的PBS,同時用手反復揉搓腹腔約1—2分鐘,以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細胞。 
4. 用尖吸管吸取腹腔液,置一潔凈試管內。 
5. 用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產生氣泡),吸取一滴滴于載玻片上,加蓋玻片鏡檢。 
6. 觀察結果,也可以將腹腔液涂片,平放于濕盤內,37℃,孵育30分鐘。取出涂片,用預溫的PBS沖洗3次,然后用甲醇固定1分鐘,以瑞氏染液1份加pH6.4的PBS 2份混勻后,滴于涂片上染色5-10分鐘,以蒸餾水沖洗(切勿先將染液傾去)后,待干,鏡檢。 

四、實驗結果 
觀察小鼠腹腔巨噬細胞和中性粒細胞對羊紅細胞的吞噬現象,計算吞噬百分比,即每100個吞噬細胞中吞噬有羊紅細胞的細胞數。也可用吞噬指數表示,即將100個吞噬細胞中所吞噬羊紅細胞的總數除以100。吞噬百分比和吞噬指數一般是平行的。

五、注意事項 
(1) 充分揉搓腹腔,盡可能將吞噬細胞沖洗下來。 
(2) 用尖吸管吸取腹腔液時,盡量避開腹腔臟器,避免損傷血管引起出血,影響實驗結果。 
(3) 用瑞氏染液染色時,切勿先將染液傾去后再沖洗,以免染液中細小顆粒附著于玻片上影響標本的清晰度

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