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凝集反應實驗步驟和原理

來源:上海士瑞化工實業有限公司   2013年12月16日 08:17  

當顆粒性抗原 ( 病原微生物或紅細胞 ) 與相應抗體持異性結合,在電解質存在下兩者比例適當時,可形成肉眼可見的凝集塊,此種現象稱為凝集反應( agglutinogen) 。細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原,在適當電解質參與下可直接與相應抗體結合形成肉眼可見的凝集塊,稱為直接凝集反應。常用的直接凝集試驗有玻片法和試管法兩種。
本實驗進行玻片凝集反應實驗。
一、細菌鑒定
玻片凝集反應 (slide agglutination) 是將已知的抗體直接與未知的顆粒性抗原物質( 如細菌、立克次體、鉤端螺旋體等 ) 混合,在有適當電解質存在的條件下,如兩者對應便發生持異性結合而形成肉眼可見的凝集物,即為陽性;如兩者不對應便無凝集物出現,即為陰性。此法屬定性試驗,主要用于細菌鑒定和分型等。
【材料】
1 .抗原,大腸桿菌( E.coli ) 18 — 24h 培養物;
抗體, 1 : 10 兔抗大腸桿菌血清。
2. 生理鹽水。
3. 潔凈載玻片、記號筆、吸管 ( 帶乳膠吸頭 ) 。
【方法】
1.取載玻片一張平置實驗臺上,用記號筆劃分為 2 格,并標明 1 、 2 。
2.用 1m 1 吸管吸取生理鹽水 1 — 2 滴于破片第 1 格內,另取一支吸管,吸取 1 : 10 兔抗大腸桿菌血清 1 — 2 滴于第 2 格內。
3.將接種環在酒精燈火焰上燒灼滅菌,冷卻后取少許大腸桿菌培養物與第 1 格內的生理鹽水混合,并涂抹成均勻懸液。然后用同樣方法烷灼接種環,待冷卻后取少許大腸桿菌培養物與第 2 格內的兔抗大腸桿菌血清混合并涂抹成均勻懸液。靜置數分鐘后觀察結果。
【結果觀察】
如上述混合懸液由均勻混濁狀變為澄清透明,并出現大小不等的乳白色凝集塊者即為陽性(+);如混合物仍呈均勻混濁狀則為陰性(-)。如肉眼觀察不夠清楚,可將玻片置于顯微鏡下用低倍鏡觀察。
本次實驗結果第 1 格內不出現凝集塊,反應為陰性。
【注意事項】
取細菌培養物時,不宜過多,與抗血清混合涂抹時,必須將細菌涂散,涂均勻,但不宜涂得太寬,以免很快干涸而影響結果觀察。
二 . 人類 ABO 血型鑒定試驗
人類 AB() 血型抗原有 A 和 B 兩種。 A 型紅細胞膜上有 A 抗原, B 型紅細胞上有 B 抗原, AB 型有 A 和 B 兩種抗原,而 O 型則不含有 A 和 B 抗原。抗 A 、抗 B 分型試劑是分別針對 A 抗原或 B 抗原的特異性抗體。當將已知的抗 A 或抗 B 試劑與受檢者紅細胞混合時,抗 A 和/或抗 B 血清與紅細胞表面上的相應抗原結合而引起紅細胞凝集,根據其凝集狀況便可判定受試者的血型。

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