（一） 免疫組織化學(xué)技術(shù)的基本原理
免疫組織化學(xué)技術(shù)是用顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項技術(shù)。即先將組織或細胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（*抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進行檢測。
免疫學(xué)的基本原理決定了免疫組織化學(xué)技術(shù)具有高度特異性，因此，免疫組織化學(xué)技術(shù)從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時才會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結(jié)合，所以免疫組織化學(xué)技術(shù)又具有敏感性高的特點。免疫組織化學(xué)技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，對組織和細胞中抗原的準確定位，使其可以同時對不同抗原在同一組織或細胞中定位觀察，并進行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究。
（二）免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用范圍
近年來，隨著抗原的提純和抗體標記技術(shù)的改進，特別是自70年代中期雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體技術(shù)的引入，使制備的抗體具有高度的特異性。簡便而敏感的免疫酶標技術(shù)能夠用于普通培養(yǎng)細胞（株）、常規(guī)福爾馬林固定石蠟包埋的組織切片、若干年前的存檔標本等，從而使該技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床病理學(xué)、微生物學(xué)診斷中，日益顯示出巨大的實用價值。目前主要應(yīng)用在如下幾個方面：
1 確定細胞類型
通過特定抗體標記出細胞內(nèi)相應(yīng)抗原成分，以確定細胞類型。如角蛋白是上皮性標記，前列腺特異性抗原僅見于前列腺上皮，甲狀腺球蛋白抗體是甲狀腺濾泡型癌的敏感標記，而降鈣素抗體是甲狀腺髓樣癌的*標記。有些細胞（如表皮內(nèi)朗格漢斯細胞、黑色素細胞、淋巴結(jié)內(nèi)指突狀和樹突狀網(wǎng)織細胞）光鏡下不易辨認，但免疫組化標記（S-100蛋白等）能清楚顯示其形態(tài)。
2 辨認細胞產(chǎn)物
利用某些細胞產(chǎn)物為抗原制備的抗體，可作為相應(yīng)產(chǎn)物的特殊標記，如內(nèi)分泌細胞產(chǎn)生的各種激素，大多數(shù)可用免疫組化技術(shù)標記出來，據(jù)此可對內(nèi)分泌腫瘤作功能分類，檢測分泌異位激素的腫瘤等。
3 了解分化程度
大多數(shù)標記物都有其特定的分布部位，如上皮細胞膜抗原（EMA）著色部位在細胞膜上，但差分化乳癌胞漿內(nèi)也可出現(xiàn)陽性顆粒；角蛋白的含量也與分化程度有關(guān)，低分化或未分化癌含量較低、染色較弱。
4 鑒定病變性質(zhì)
通過標記Ig輕鏈（κ、λ）可區(qū)分部分B細胞性淋巴瘤與B細胞反應(yīng)性增生，前者常表達單一的Ig輕鏈（κ+/λ+），后者常為多克隆Ig輕鏈（κ+、λ+）。而標記bcl-2蛋白在區(qū)別濾泡型淋巴瘤和反應(yīng)性濾泡增生上有相當?shù)囊饬x。在濾泡型淋巴瘤，90%以上腫瘤性濾泡細胞有bcl-2的高表達；而在濾泡反應(yīng)性增生時，濾泡反應(yīng)中心的細胞不表達bcl-2蛋白，而套細胞則表達。
5 發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶
某些癌的早期轉(zhuǎn)移有時與淋巴結(jié)內(nèi)竇性組織細胞增生不易區(qū)別。用常規(guī)病理組織學(xué)方法要在一個組織中認出單個轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞或幾個細胞是不可能的，而采用免疫組化方法（如用上皮性標志）則十分有助于微?。ò┺D(zhuǎn)移灶的發(fā)現(xiàn)。對轉(zhuǎn)移性腫瘤也可借助免疫組化標志尋找原發(fā)瘤，如骨組織內(nèi)有前列腺特異性抗原陽性細胞，提示前列腺癌轉(zhuǎn)移。
6 探討腫瘤起源或分化表型
一些來源不明的腫瘤長期爭論不休，zui后通過免疫組化標記取得共識。如顆粒性肌母細胞瘤，曾被認為是肌源性的，但該腫瘤肌源性標記陰性，而神經(jīng)性標記陽性，證明為神經(jīng)來源（可能來自神經(jīng)鞘細胞）。分化很差的腫瘤病理上常按細胞形態(tài)分為梭形細胞腫瘤、小圓細胞腫瘤等，通過多種標記的聯(lián)合應(yīng)用，也可能確定其來源。
7 確定腫瘤分期
判斷腫瘤是原位還是浸潤及有無血管、淋巴管侵襲與腫瘤分期密切相關(guān)。用常規(guī)病理方法判斷有時是十分困難的，但用免疫組化法可獲得明確結(jié)果。如采用層粘連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可清楚顯示基底膜的主要成分，一旦證實上皮性癌突破了基底膜，就不是原位癌，而是浸潤癌了，其預(yù)后是不同的。用第八因子相關(guān)蛋白、荊豆凝集素等顯示血管和淋巴管內(nèi)皮細胞的標記物則可清楚顯示腫瘤對血管或淋巴管的浸潤。對許多腫瘤的良惡性鑒別及有無血管或淋巴管浸潤，這是主要的鑒別依據(jù)，同時也有治療及預(yù)后意義。