感受態(tài)專題：真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實驗步驟

來源：上海北諾生物科技有限公司 2013年11月11日 15:18

1. 在6孔板中接種1~3×105細(xì)胞/孔，加入2ml*培養(yǎng)基，置CO2孵箱中37℃培養(yǎng)過。

2. 待細(xì)胞長到50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：

i. 溶液A：將4?g待轉(zhuǎn)染的超純DNA稀釋到250?l無血清培養(yǎng)基中，靜置5min

ii. 溶液B：將2-25?l LipofectAMINE 稀釋到250?l無血清培養(yǎng)基中，靜置5min

3. 混合溶液A和B，輕輕混勻，室溫放置15-45min。

4. 用2ml無血清培養(yǎng)基輕輕洗滌細(xì)胞，加入0.8ml無血清培養(yǎng)基/孔，將脂質(zhì)體復(fù)合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。

5. 用*培養(yǎng)基替換轉(zhuǎn)染液，繼續(xù)培養(yǎng)。

6. 24-72hr后檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩(wěn)定表達(dá)株。

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