手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。
實驗方法
- 小量制備
- 氯化銫法
| 實驗方法原理 | 提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質，得到的DNA溶液經乙醇沉淀使DNA從溶液中析出。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 細菌 |
| 試劑、試劑盒 | 溴化乙錠 氯化銫 丁醇 |
| 儀器、耗材 | 離心機 巴斯吸管 搖床 |
| 實驗步驟 | 1. 培養100 ml 細菌培養物至飽和狀態，用JA-20轉子4 000 g 離心10 min。 2. 用9.5 ml 的TE緩沖液重懸沉淀。 3. 加0.5 ml 10%的SDS和50 μl 20 mg/ml 的蛋白酶K，混合，于37℃溫育1 h。 4. 加1.8 ml 5 mol/l NaCl，充分混合，加入1. 5 ml CTAB/NaCl溶液，混合，于65℃溫育20 min。 5. 加等體積的氯仿/異戊醇抽提，室溫下6 000 g 離心10 min，用寬口吸管將上清液轉移至新管中。 6. 加化6體積的異丙醇，輕輕混合直至沉淀下來，用一個封口的巴斯德吸管將沉淀轉移至70%乙醇中冼滌。 7. 10 000 g 離心5 min，棄上清，用4 ml TE緩沖液重懸沉淀。 8. 用分光光度計檢測DNA的濃度，將其調節到50~100 μg/ml。 9. 每4 ml 緩沖液加人4.3 g CsCl，并使之溶解，加入200 μl 的10 mg/ml 的溴化乙錠。 10. 轉移至4 ml 快封口離心管中，調節體積，用TE緩祌液配制的CsCl平衡離心管，封住管口。 11. 用VTi80轉子于15℃，以420 000 g 離心4 h或 250 000 g。 12. 在長波紫外燈下觀察梯帶，用15號針頭和3 ml 塑料注射器移出條帶。 13. 用CsCl飽和的異丙醇或水飽和的丁醇離心抽提，以除去溴化乙錠。 14. 在2 L TE緩沖液中透折以除去CsCl，如果必要，沉淀DNA并重新溶解至所需要的濃度。 |
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心