雜交液：
雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血清白蛋白及載體DNA或RNA等。

雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。

所以，雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達到提高雜交率的目的（尤其對雙鏈核酸探針）。

在雜交液中加入牛血清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合，以減低背景。

探針的濃度：
探針濃度依其種類和實驗要求略有不同，一般為0.5~5.0 μg/ml（0.5~5.0 ng/μl）。zui適宜的探針濃度要通過實驗才能確定。

探針的長度：
一般應(yīng)在50-300個堿基之間，zui長不宜超過400個堿基。探針短易進入細(xì)胞，雜交率高，雜交時間短。

二、試劑準(zhǔn)備
1.   0.1 M PBS （pH7.2）：Na₂HPO₄•12 H₂O 61.6 g、NaH₂PO₄•2 H₂O 5.6 g、NaCl 9 g，加ddH₂O至2000 ml，高壓滅菌。
2.  0.2 M PB （（pH7.2）：Na₂HPO₄•12 H₂O 61.6 g、NaH₂PO₄•2 H₂O 5.6 g 加ddH₂O至1000 ml，高壓滅菌。
3.  0.1 M甘氨酸：0.75g甘氨酸溶于0.1 M PBS，定容至100 ml，高壓滅菌。
4.  4%多聚甲醛：多聚甲醛40 g加ddH₂O 400 ml，加熱至70℃左右，用1 M NaOH調(diào)pH至7.0，用ddH₂O定容至500 ml，再加0.2 M PBS 500 ml，總體積為1000 ml。
5.  16×Denhardt溶液：聚乙烯吡咯酮0.4 g、小牛血清白蛋白（BSA） 0.4 g、聚蔗糖0.4 g，加dd H₂O至10 ml，無菌抽濾、分裝， -20℃保存?zhèn)溆谩?br />6.  預(yù)雜交液：去離子甲酰胺10 ml、50%硫酸葡聚糖4 ml，于50℃促溶后，再依次加入16×Denhardt液0.2 ml、1 M Tris-HCl（pH 8.0） 0.2 ml、5 M NaCl 1.2 ml、0.5 M EDTA（pH 8.0） 0.04 ml、0.1 M 二硫蘇糖醇 2 ml、ddH₂O 2.21 ml，總體積為10 ml。無菌抽濾、分裝，-20℃保存?zhèn)溆谩ＥR用前加入50 mg/ml 變性鮭魚精DNA 75 μl/ml。
7.  20×SSC: NaCl 175.3 g、檸檬酸三鈉88.2 g，加水至800 ml，用2 N NaOH調(diào)pH至7.0，再用ddH₂O定容至1000 ml。
8.  抗體稀釋液：Triton X-100 80 μl、BSA 0.2 g，以0.05 M PBS定容至20 ml。
9.  TSM1：1 M Tris-HCl（pH 8.0）10 ml、5 M NaCl 2 ml、1 M MgCl₂ 1ml，加ddH₂O 100 ml。
TSM2（新鮮配制）：1 M Tris-HCl（pH 9.5）10 ml、5 M NaCl 2 ml、1 M MgCl₂ 1 ml，加ddH₂O至100 ml。
顯色液（臨用前現(xiàn)配）：5 ml TSM2 加顯色液原液（NBT/BCIP）150 μl，并加適量左旋咪唑使其終濃度為0.24 μg/ml，避光。