實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)分離純化透析終點(diǎn)的抉擇

在蛋白質(zhì)分離純化過程中，用到透析方法，但如何判斷透析過程結(jié)束了呢？針對(duì)具體蛋白質(zhì)怎么知道要透析多久？ 在蛋白質(zhì)分離純化實(shí)驗(yàn)中，客戶經(jīng)常會(huì)提及蛋白質(zhì)透析終點(diǎn)該如何判斷，以下是我司技術(shù)根據(jù)各種實(shí)驗(yàn)總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)之談，方便大家學(xué)習(xí)交流。

一：
市場(chǎng)上有種筆式電導(dǎo)儀，測(cè)量范圍在1－2000us/cm，價(jià)格才一兩百元，使用也非常方便。要是透析后上柱的話，電導(dǎo)在1500以下就可以了。
二：
我做過蛋白的純化，透析也是常做的。
我覺得上面的一些朋友說得太理論了。樓主剛接觸蛋白純化，用的是透析袋吧。
根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，想*把蛋白里的鹽分透掉不可能，而且蛋白在透析的過程中多少會(huì)損失一部分，所以我覺得如果你的蛋白很珍貴，就不用非透得很干凈，否則適得其反，經(jīng)常換超純水倒是很重要的，一般透?jìng)€(gè)24小時(shí)-48小時(shí)足夠了。要加滿水，充分浸泡。
蛋白如果含鹽量高，凍干后往往含有結(jié)晶樣的物質(zhì)比較多，
而蛋白如果含鹽量低，則凍干后往往成棉絮狀
這從表觀上有助于你判斷透析效果，或者你可以取一些蛋白，溶解后測(cè)蛋白質(zhì)質(zhì)量百分?jǐn)?shù)，剩下的基本就是鹽含量了。
提醒你一下：
透析袋不能太小，否則透析后可能會(huì)脹破袋子，那就慘了。
太大也不好，容易讓蛋白殘留在袋內(nèi)，記得用移液器加蛋白，取蛋白，這樣能zui大限度節(jié)約蛋白。
三：
如果是NAcl,可用硝酸銀溶液滴到透析液中無沉淀渾濁就可以,同樣道理如果是硫酸根離子可用氯化鋇溶液去滴,別的就不知道了.當(dāng)然也可用電導(dǎo)儀測(cè)定電導(dǎo),這樣.時(shí)間長(zhǎng)短和你樣品鹽濃度,透析攪拌速度,用的透析液體積等都有關(guān)系,沒確切時(shí)間.
四：
測(cè)電導(dǎo)是非常可行的。
現(xiàn)測(cè)你所用透析緩沖液的電導(dǎo)，再測(cè)一下你樣品的電導(dǎo)，透析到你的樣品中的電導(dǎo)率與透析緩沖液的電導(dǎo)率接近為止。

看你更換緩沖液的速度，如果你不斷攪拌并1h左右更換一次緩沖液的話4-6次就可以透析的差不多了，如果你不想多次從透析袋中取出樣品可以在第六次的時(shí)候測(cè)一下電導(dǎo)；如果你在4度透析的話建議4h更換一次，加上過一夜一共換3-4次就差不多了。關(guān)鍵看不在什么環(huán)境下透析，你的樣品在什么樣的環(huán)境下比較穩(wěn)定。


蛋白質(zhì)的定義：
1：生物體中廣泛存在的一類生物大分子，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈，經(jīng)翻譯后加工而的具有特定立體結(jié)構(gòu)的、有活性的大分子。泛指某一類蛋白質(zhì)，與前面的限定詞組成復(fù)合詞時(shí)，一律用“蛋白質(zhì)”，如血漿蛋白質(zhì)、纖維狀蛋白質(zhì)、酶蛋白質(zhì)等，此時(shí)“質(zhì)”字不得省略（習(xí)慣詞除外，新命名者從此）。凡指具體蛋白質(zhì)時(shí)，“質(zhì)”字可省略，如血紅蛋白、肌球蛋白等。
2：不同氨基酸以肽鍵相連所組成的具有一定空間結(jié)構(gòu)的生物大分子物質(zhì)。
蛋白質(zhì)（protein）是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，沒有蛋白質(zhì)就沒有生命。因此，它是與生命及與各種形式的生命活動(dòng)緊密在一起的物質(zhì)。機(jī)體中的每一個(gè)細(xì)胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。蛋白質(zhì)占人體重量的16.3%，即一個(gè)60kg重的成年人其體內(nèi)約有蛋白質(zhì)9.8kg。人體內(nèi)蛋白質(zhì)的種類很多，性質(zhì)、功能各異，但都是由20多種氨基酸按不同比例組合而成的，并在體內(nèi)不斷進(jìn)行代謝與更新。
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