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鈣離子熒光探針FLUO-3AM應用詳解

來源:北京博蕾德生物科技有限公司   2013年06月17日 10:34  

一、Fluo-3AM的理化性質
顏色及形狀:橘紅色液體
純度:,大于95%(液相)
溶解性:溶于DMSO
吸收波長/發射波長:506nm /526nm(低/高鈣)  
消散系數:86000/Mcm(506nm)
保存與使用:粉狀的FLUO-3AM應保存于-20度以上。建議使用DMSO作為溶媒。在溶解前,FLUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過程可能會比較慢。用無水的DMSO溶解的FLUO-3AM長期保存,應嚴格密封,并保存于-20度。使用前,將保存液放置至室溫后再打開。可避免AM探針在長期的保存過程中水解。
二、Fluo-3AM的工作原理
      FLUO-3廣泛用于長波長的熒光鈣指示劑。其在506NM處被吸收,可以被氬離子激光的488nm激發光激發,便于檢測。FLUO-3在沒有同鈣結合的情況下,無熒光產生。但是,在與鈣結合后,熒光(526nm)增強至少40倍。Fluo-3 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱,其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-3 AM進入細胞后可以被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細胞內。Fluo-3可以和鈣離子結合,結合鈣離子后可以產生較強的熒光,zui大激發波長為506nm,zui大發射波長為526nm。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm左右,發射波長為525-530nm。
三、Fluo-3AM的應用
1、過程概述
用于細胞內鈣離子檢測時,Fluo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM的適當溶液和細胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進行熒光探針裝載,隨后適當洗滌,洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內*轉變成Fluo-3。然后在流式細胞儀上進行檢測。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM,分子量是1219.9。按實際需要的摩爾濃度折算,無水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲存液。如出現難溶現象,可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
四、注意事項:
1、熒光染料有淬滅問題,應盡量避光保存;
2、實驗時注意個人防護,戴手套、口罩;
五、應用舉例
(一)配置與貯存
1、基本信息
 分子量:1129.9                  包裝單位重量:0.1mg
 貯存濃度:5000μM/L             使用終濃度:5μM/L
2、貯存液的配制(5000μM/L)
   按照說明書,計算0.1mg 的摩爾數為0.089μM ,則需加DMSO18uL,微量加樣器反復吹打混勻后分裝,按說明書要求避光-20度冰凍保存。
(二)應用
   每毫升細胞懸液中加入1 uL,則Fluo-3AM的使用終濃度為5μM/L
 
訂購信息:
 
貨號
名稱
規格
價格
50013
Fluo-3, AM ester, 10x100ug
1mg
300
50013
Fluo-3, AM ester, 100ug
100ug
2000

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