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上海通善生物科技有限公司提供zui的
生物素連接酶（Biotin Ligase）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
生物素連接酶（Biotin Ligase, BirA, EC 6.3.4.15）是大腸桿菌BirA基因編碼的雙功能蛋白質(zhì)，能識(shí)別蛋白質(zhì)分子的特異序列（BirA Substrate Peptide），使蛋白質(zhì)生物素化。該酶帶有6×His標(biāo)簽，剪切反應(yīng)完畢后可通過(guò)Ni-NTA（產(chǎn)品貨號(hào)：PAN001）去除。
來(lái)源
重組蛋白質(zhì)（E.coli）
活力單位定義
在30℃，30分鐘內(nèi)，將1 pmol 蛋白質(zhì)或者多肽（融合BSP序列）生物素化所需要的酶量定義為一個(gè)活力單位。
純度
純度 > 95%，沒(méi)有檢測(cè)到其他蛋白酶活力。
應(yīng)用
生物素標(biāo)記融合BSP的蛋白質(zhì)。
儲(chǔ)存條件
冰袋運(yùn)輸；分裝保存，避免反復(fù)凍融；長(zhǎng)期保存-20℃，短期可在4℃保存數(shù)星期。
反應(yīng)體系
| 組分 | 體積（μl） | 終濃度 |
|---|---|---|
| 10X buffer A | 2.5 | 1X |
| 10X buffer B | 2.5 | 1X |
| Biotin Ligase（1kU/μL） | 1.5 | 45 U/μl |
| 蛋白或者多肽底物 （1 nmol） | 18.5 | 40 μM |
30℃，溫浴30分鐘。
注意事項(xiàng)
- 不同的BSP序列，生物素化反應(yīng)所需要的時(shí)間可能會(huì)有不同。
- 反應(yīng)底物量比較大的時(shí)候，可以同時(shí)放大反應(yīng)體系。或者蛋白/多肽的濃度加大一倍，補(bǔ)加2.5ul的D-Biotin。
- 底物濃度低的時(shí)候，需要孵育的時(shí)間要延長(zhǎng)。
- 需要較低的溫度孵育時(shí)候，反應(yīng)時(shí)間要加長(zhǎng)
- 氯化鈉（>100mM）,甘油（>5%）,硫酸銨（>50mM）等常用緩沖液成分會(huì)抑制酶的活力。所以底物盡量保存在低鹽的溶液中。
產(chǎn)品規(guī)格
| 貨號(hào) | 規(guī)格 | 包裝規(guī)格 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| Biotin Ligase | 10X buffer A | 10X buffer B | D-Biotin | ||
| RPE004-100 | 100 kU | 100 μl | 200 μl | 200 μl | 200 μl |
| RPE004-500 | 500 kU | 500 μl | 1 ml | 1 ml | 1 ml |
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