a 有機溶媒法
粉碎后的新鮮材料在0℃以下加入5~10 倍量的丙酮,迅速攪拌均勻,可破碎細胞膜,破壞蛋白質與脂質的結合。蛋白質一般不變性,被脫脂和脫水成為干燥粉末。用少量洗,經濾紙干燥,如脫氫酶等可保存數月不失去活性。
b 自溶法
將待破碎的鮮材料在一定pH 和適當的溫度下,利用自身的蛋白酶將細胞破壞,使細胞內含物釋放出來。比較穩定,變性較難,蛋白質不被分解而可溶化。利用該法可從胰臟制取羧肽酶。自體融解時需要時間,需加少量甲苯、氯仿等。應防止細菌污染。于溫室30℃左右較早溶化。自體融解過程中PH 顯著變化,隨時要調節pH。自溶溫度選在0~4℃,因自溶時間較長,不易控制,所以制備活性蛋白質時較少用。
c 酶法
與前述的自體融法同理,用胰蛋白酶等蛋白酶除去變性蛋白質。但值得提出的是溶菌酶處理時,它能水解構成枯草菌等菌體膜的多糖類。能溶解菌的酶分布很廣。尤其卵白中含量高,而多易結晶化。1g 菌體加1~10mg 溶菌酶, pH6.2~7.01h 內*溶菌。于生理食鹽水或0.2mol 蔗糖溶液中溶菌,雖失去細胞膜,但原形質沒有脫出。除溶菌酶外,蝸牛酶及纖維素酶也常被選為破壞細菌及植物細胞用。表面活性劑處理較常用的有十二烷基磺酸鈉、氯化十二烷基吡淀及去氧膽酸鈉等。此外一些細胞膜較脆弱的細胞,可把它們置于水或低滲緩沖劑中透析將細胞脹破。
葡萄糖氧化酶/GOX/GOD/Glucose oxidase |
D-α-氨基氧化酶/D-氨基酸氧化酶/D-AAO |
L-氨基酸氧化酶/L-AAO/TM-LAO/L-amino acid oxidase |
己糖激酶/己糖磷酸激酶/HK/Hexokinase from Saccharomyces cerevisiae |
胃蛋白酶(豬胃粘膜)/胃液素/胃朊酶/蛋白酵素/酸腈酶/百布圣/Pepsin(porcine stomach mucose) |
胰酶粉/胰酵素/胰醇素/胰液素/Pancreatin |
胰蛋白酶(牛胰)/Trypsin(bovine pancreas) |
胰蛋白酶(豬胰)/Trypsin(porcine pancreas) |
脂肪酶(豬胰)/脂酶/脂肪水解酶/脂肪分解酵素/三酰基甘油酰基水解酶/PPL/Lipase(pocine pancreas) |
過氧化氫酶(牛肝)/氯化酵素/CAT/Catalase(bovine liver) |
溶菌酶(蛋清)/脆壁質酶/球蛋白G/N-乙酞胞壁質聚糖水解酶/Lysozyme(Chinken egg) |
溶葡球菌酶/溶葡萄球菌酶/Lysostaphin |
氯化溶菌酶/溶菌酶氯化物/Lysozyme chloride |
纖維素酶(綠色木霉)/1,4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶/Cellulase(Trichoderma Vride G) |
纖維素酶R-10/1,4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶/Cellulase Onozuke R-10 |
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