儲存條件：
細胞裂解液R 4℃放置；溶菌酶（100ug/ul） -20℃保存；其他試劑室溫保存。另外，為了去除RNA 中少量殘存的DNA，客戶可根據需要購買DNase I。
產品簡介
本試劑盒可從細菌細胞中快速提取總RNA，可同時處理大量不同樣品。提取的總RNA 純度高，沒有蛋白和其它雜質的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern blot、Dot blot、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。預防RNase污染，應注意以下幾方面：
1. 經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌，可能導致RNase 污染。
2. 使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3. RNA 在細菌細胞裂解液中時不會被RNase 降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水*清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4. 配制溶液應使用RNase-free ddH2O。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%（ v/v），混勻后放置過夜，高壓滅菌。）
使用前注意事項
1. 裂解液在儲存時可能會形成沉淀，如果有沉淀出現，請加熱溶解后使用。
2. *次使用前應在漂洗液RW 中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標簽。
操作步驟
柱平衡步驟：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入500μl 平衡液，12,000 rpm（~13,400×g ）離心1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中備用（請使用當天處理過的柱子）。
1． 4℃12,000 rpm（~13,400×g）離心2 分鐘收集菌體（收集菌體的zui大量不超過1×109），仔細去除所有培養基上清。
注：如果培養基上清去除不*，將對第二步中的細胞壁消化過程產生抑制。
2． 用含有溶菌酶的100 ul 細胞懸浮液（客戶自己配制，配制方法見下表）*重懸菌體，孵育時間如下。
細胞懸浮液中的溶菌酶終濃度 孵育時間（室溫）
G-細菌 400 ug/ ml 3-5 min
G+細菌 3 mg/ ml 5-10 min
3. 加入1ml 裂解液R，渦旋振蕩混勻，若出現不溶性沉淀，12000 rpm（~13,400×g）離心2 分鐘，將上清轉移至另一離心管中。
4. 每1ml 裂解液R加0.2ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，劇烈振蕩15秒并將其在室溫下孵育3分鐘。
5. 于4℃ 12，000rpm 離心10分鐘，樣品會分成三層：下層有機相，中間層和上層無色的水相，RNA存在于水相中。水相層的容量大約為所加R體積的60%，把水相轉移到吸附柱中（吸附柱套在收集管內）。
6. 12，000rpm 離心45秒，棄掉廢液，將吸附柱重新套回收集管。
7. 加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心45秒，棄掉廢液。
8. 加入500μl漂洗液RW，12,000 rpm 離心45秒，棄掉廢液。
9. 將吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
10. 取出吸附柱，放入一個新的RNase free離心管中，根據預期RNA產量在吸附膜的中間部位加60-100μl RNase free water， 室溫放置2分鐘， 12,000 rpm 離心1分鐘。得到RNA溶液。
（洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要RNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是zui小體積不少于50μl，體積過小降低RNA洗脫效率，減少RNA產量。）
RNA純度及濃度檢測
完整性： RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳 （電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE 電泳緩沖液；150v，15 分鐘）檢測完整性。由于細胞中70%-80%的RNA 為rRNA，電泳后UV 下應能看到非常明顯的rRNA 條帶。28S rRNA 的量約為18S rRNA 的兩倍，說明RNA 的完整性較好。
純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的RNA，OD260/OD280 讀數在1.8-2.1 之間，比值為2.0 是高質量RNA 的標志。OD260/OD280 讀數受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA 樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數則可能在1.5-1.9 之間，但這并不表示RNA 不純。
濃度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free ddH2O稀釋n 倍，用RNase-freeddH2O 將分光光度計調零，取稀釋液進行OD260, OD280 測定，按照以下公式進行RNA濃度的計算：
終濃度（ng/μl）= （OD260）×（稀釋倍數n）×40
DNase I儲存液的配制
將DNase I 干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-free ddH2O 中，輕柔混勻，分裝后-20℃貯存（可保存9 個月）。
DNA reaction buffer：
100mM Tris-HCl（ pH 7.5 ）
25mM MgCl2
5 mM CaCl2
注意：從-20℃融化后的DNase I 儲存液保存于4℃（可保存6 周），不要再次凍存。