在 Western Blot 實驗中,抗體稀釋液從穩定抗體活性、降低背景信號、增強特異性結合等方面發揮關鍵作用,保障實驗的準確性和可靠性。我將結合文章內容,詳細闡述其具體作用機制。
穩定抗體活性:Western Blot 實驗流程較長,抗體在稀釋和孵育過程中易受外界因素影響而變性、聚集或降解,從而失去活性,導致與目標蛋白的結合能力下降。如 CS601-100 通用型抗體稀釋液中的特殊蛋白穩定劑,能與抗體分子結合形成保護性分子層,顯著延長抗體活性保持時間。以腫瘤標志物研究實驗為例,使用該稀釋液后,在整個實驗過程中,抗體都能維持高活性狀態,與目標蛋白特異性結合,保證實驗結果的準確性和重復性。
降低背景信號:非特異性結合是導致 Western Blot 實驗背景信號過高的主要原因,過多的背景信號會干擾目標蛋白條帶的觀察和分析。抗體稀釋液中的非離子型表面活性劑,可降低固相膜表面張力,使抗體均勻分布,減少與膜的非特異性吸附。同時,它還能清除膜表面雜質和未結合蛋白質,進一步降低背景噪音。在自身免疫性疾病抗體檢測實驗中,使用此類稀釋液,能讓目標蛋白條帶更加清晰,有助于臨床醫生準確判斷檢測結果 。
增強抗體特異性結合:合適的離子環境對抗體與目標蛋白特異性結合至關重要。抗體稀釋液優化的緩沖體系,如由 Tris - HCl 和氯化鈉組成的緩沖系統,可維持溶液中恰當的離子強度,確保抗體抗原結合位點保持正確空間構象,增強兩者之間的親和力和特異性識別能力。在藥物研發對靶蛋白表達檢測的實驗中,使用該稀釋液稀釋一抗和二抗,能明顯增強目標蛋白條帶信號強度,減少假陽性結果,準確反映藥物對靶蛋白的調控作用 。